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花生壳中木犀草素的分离纯化技术研究及其活性评价

作　者: 王晴晴
导　师: 刘仲华；张盛
学　校: 湖南农业大学
专　业: 营养与食品卫生学
关键词: 花生壳 木犀草素 分离 纯化 活性评价
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


木犀草素具有多种重要的生理功能如抗氧化、镇咳、祛痰平喘、抗菌消炎、增强免疫和抗肿瘤等,木犀草素在花生壳中含量较高,为更好地开发利用我国丰富的花生壳资源,本实验进行了花生壳中木犀草素的分离纯化技术研究及其活性评价。1、建立了同时测定花生壳中绿原酸、3,4-二咖啡酰奎尼酸和木犀草素三种有效成分含量的反相高效液相色谱方法。采用Kromasil C18柱(200mm×4.6mm,5μm),乙腈和0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,流速为1.0mL/min,检测波长340nm,柱温27℃。在该色谱条件下,绿原酸、3,4-二咖啡酰奎尼酸和木犀草素的质量浓度分别在3.75μg/mL-60μg/mL(R2=0.9999),7.26μg/mL-193.6μg/mL(R2=0.9999), 17.25μg/mL-276μg/mL(R2=0.9997)范围内与色谱峰面积呈现良好的线性关系,平均加标回收率(n=5)为121.6%,97.79%,124.35%,RSD分别为0.71%,1.49%,0.44%。该分析方法快速准确、重现性好,可应用于花生壳资源产业开发质量标准建立与完善。本文比较花生壳中木犀草素的两种提取方法,乙醇回流提取、超声波提取。2、进行大孔吸附树脂柱色谱法制备木犀草素的研究。选用8种树脂为吸附剂,以树脂对花生壳中木犀草素的吸附率和解吸率作为考察指标,筛选出NKA-9树脂纯化花生壳中总黄酮与木犀草素,并确定最佳工艺参数。3、建立非酒精性脂肪肝模型,加入不同剂量的木犀草素,通过测定细胞活力(MTT)、TC及TG的含量,细胞培养液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性研究木犀草素对非酒精性脂肪肝的保护作用。研究表明木犀草素可显著降低TC、TG的含量,降低AST和ALT的漏出量,对非酒精性脂肪肝细胞有保护作用。4、探讨木犀草素(luteolin)对H202氧化损伤L02肝细胞的影响。采用不同浓度的H202诱导正常L02肝细胞建立损伤细胞模型,加入不同剂量的木犀草素,通过测定细胞活力(MTT)及超氧化物歧化酶(SOD)活性,细胞培养液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性研究木犀草素对氧化损伤细胞的保护作用。研究表明木犀草素组可显著升高氧化损伤肝细胞活力,提高细胞SOD活性,降低AST和ALT的漏出量,对H202氧化损伤肝细胞有保护作用。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-12
第一章 文献综述  12-20
  1 花生壳的研究和开发现状  12-15
    1.1 花生壳的化学成分  12
    1.2 花生壳国内外研究和开发现状  12-15
      1.2.1 食品行业中的应用  12-14
      1.2.2 化工行业中的应用  14-15
  2 木犀草素的研究和开发现状  15-19
    2.1 木犀草素的理化性质  16-17
      2.1.1 木犀草素物理性质  16
      2.1.2 木犀草素化学性质  16-17
    2.2 木犀草素的生理特点  17-19
      2.2.1 抗氧化  17
      2.2.2 抗炎  17
      2.2.3 抗肿瘤  17-18
      2.2.4 抗纤维化  18
      2.2.5 治疗心血管疾病  18
      2.2.6 治疗平喘  18
      2.2.7 抗生育  18-19
      2.2.8 其它方面作用  19
  3 本文的研究意义及内容  19-20
    3.1 研究意义  19
    3.2 研究内容  19-20
      3.2.1 木犀草素的测定  19
      3.2.2 木犀草素的提取  19
      3.2.3 木犀草素的富集  19
      3.2.4 木犀草素的活性评价  19-20
第二章 花生壳中木犀草素的提取工艺研究  20-31
  1 材料与方法  20-23
    1.1 实验对象  20
    1.2 实验仪器  20
    1.3 试剂  20
    1.4 方法  20-23
      1.4.1 花生壳中木犀草素、3,4-二咖啡酰奎尼酸、绿原酸的测定方法建立  20-21
      1.4.2 花生壳中木犀草素的提取  21-23
  2 结果与分析  23-28
    2.1 花生壳中木犀草素、3,4-二咖啡酰奎尼酸、绿原酸测定方法的建立  23-24
      2.1.1 标准曲线的绘制  23
      2.1.2 精密性试验  23
      2.1.3 重复性试验  23-24
      2.1.4 稳定性试验  24
      2.1.5 加标回收率  24
    2.2 花生壳中木犀草素的提取  24-28
      2.2.1 乙醇回流提取  24-26
      2.2.2 超声波提取  26-28
  3 讨论  28-29
    3.1 高效液相色谱法  28-29
      3.1.1 高效液相色谱的特点  28-29
      3.1.2 花生壳提取物的分离  29
    3.2 乙醇回流提取  29
      3.2.1 溶剂提取法  29
      3.2.2 回流提取法  29
  4 结论  29-31
    4.1 高效液相色谱的检测条件  29-30
    4.2 醇回流提取  30
    4.3 超声波提取  30-31
第三章 花生壳乙醇提取物的分离纯化  31-39
  1 材料与方法  31-34
    1.1 实验对象  31
    1.2 实验仪器  31
    1.3 试剂  31
    1.4 试验方法  31-34
      1.4.1 木犀草素试样的制备  31
      1.4.2 标准溶液的配置  31-32
      1.4.3 木犀草素的液相色谱条件  32
      1.4.4 树脂的预处理  32
      1.4.5 木犀草素乙醇上样浓度  32
      1.4.6 静态法筛选树脂  32-33
      1.4.7 最大上样量考察  33
      1.4.8 上样PH值考察  33
      1.4.9 解吸PH值的考察  33
      1.4.10 醇解吸浓度的考察  33
      1.4.11 洗脱终点的考察  33-34
  2 结果与分析  34-37
    2.1 乙醇上样浓度  34
    2.2 静态法筛选树脂  34-35
    2.3 最大上样量  35
    2.4 上样PH值  35-36
    2.5 解吸PH值  36
    2.6 乙醇解吸浓度  36-37
    2.7 洗脱终点  37
  3 讨论  37-39
    3.1 树脂分离的原理  37
    3.2 恒重  37-38
    3.3 结论  38-39
第四章 细胞损伤模型的建立和木犀草素的保护作用  39-56
  1 材料与方法  39-42
    1.1 实验对象  39
    1.2 实验仪器  39
    1.3 试剂  39-40
    1.4 主要试剂的配制  40
      1.4.1 5mg/mLMTT溶液  40
      1.4.2 H_2O_2溶液配制  40
      1.4.3 木犀草素溶液配置  40
    1.5 试验方法  40-42
      1.5.1 细胞培养前的准备  40
      1.5.2 细胞的复苏  40-41
      1.5.3 细胞的传代  41
      1.5.4 细胞损伤模型的建立  41-42
      1.5.5 木犀草素对损伤肝细胞的影响  42
      1.5.6 检测指标的方法  42
      1.5.7 统计学处理  42
  2 结果与分析  42-52
    2.1 木犀草素对非酒精性脂肪肝的保护作用  42-46
      2.1.1 MTT的变化  42-44
      2.1.2 AST、ALT、TC及TG的变化  44-46
    2.2 木犀草素对氧化损伤肝细胞的影响  46-52
      2.2.1 MTT的变化  46-48
      2.2.2 AST、ALT及SOD活性的变化  48-49
      2.2.3 MTT的变化  49-50
      2.2.4 AST、ALT及SOD活性的变化  50-52
  3 讨论  52-55
    3.1 木犀草素对非酒精性脂肪肝细胞的保护作用  52-53
      3.1.1 非酒精性脂肪肝  52
      3.1.2 木犀草素对非酒精性脂肪肝细胞活力的影响  52
      3.1.3 木犀草素对非酒精性脂肪肝细胞AST、ALT、TC及TG的影响  52-53
    3.2 自由基及氧化应激  53
    3.3 H_2O_2氧化损伤L02肝细胞模型的建立及鉴定  53-54
      3.3.1 H_2O_2性质  53
      3.3.2 细胞活力测定  53-54
      3.3.3 氧化损伤对AST、ALT及SOD的影响  54
    3.4 木犀草素对氧化损害肝细胞的保护作用  54-55
      3.4.1 木犀草素的抗氧化能力  54-55
      3.4.2 木犀草素对氧化损伤肝细胞活力的影响  55
      3.4.3 木犀草素对氧化损伤细胞AST、ALT及SOD的影响  55
  4 结论  55-56
    4.1 木犀草素对非酒精性脂肪肝的作用  55
    4.2 H_2O_2诱导正常LO2肝细胞氧化损伤模型  55
    4.3 木犀草素对氧化损伤肝细胞的作用  55-56
第五章 全文创新点与展望  56-57
  1 创新点  56
  2 展望  56-57
参考文献  57-63
致谢  63

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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