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西安地区出土3000年前人釉原蛋白基因的分析

作　者: 王培欢
导　师: 邵金陵；段小红
学　校: 第四军医大学
专　业: 口腔临床医学
关键词: 牙齿古DNA 釉原蛋白基因单核苷酸多态性 PCR
分类号: R78
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

随着现代分子生物学的不断发展及实验技术的不断进步,古DNA研究已经广泛应用于考古学、人类学、生物学及遗传学等诸多领域,为考古发掘出的古代人物的身份鉴定、人类的演化迁徙、生物的起源进化及疾病的遗传流行等提供了分子生物学上的证据。在釉质发生的早期阶段,釉质中的蛋白质含量高达20%~30%。其中,釉原蛋白是釉质发育过程中最为丰富的蛋白成分,在釉质矿化的第一阶段占釉基质的60%~90%。在釉质的形成过程中,釉原蛋白作为最主要的细胞外基质蛋白可能在釉质微观结构模式形成和演化过程中扮演了重要的角色。釉原蛋白基因在不同种属中均有表达,被看做种系发生分化的一个重要标志物。人类釉原蛋白基因是分别位于X和Y染色体上的一对等位基因,其在两条性染色体上的不同表达成为性别鉴定的重要方法。本课题建立了一种利用古人类牙齿提取基因组DNA的简便方法,从西安地区出土3000年前人牙齿中提取出基因组DNA,设计釉原蛋白基因特异性引物,采用PCR技术对所选样本进行了性别鉴定,同时对西安地区出土3000年前人釉原蛋白基因高可变区变异位点进行了筛查,并比较了西安地区出土3000年前人与现代西安人釉原蛋白基因相应SNP位点不同基因型的出现频率。本课题的主要研究结果如下:1.“逆向根管技术”和Chelex-100提取法相结合的方法可成功从3000年前人牙齿中提取出基因组DNA,提取过程中不仅较大程度的保证了实验用牙的形态完整性,同时所提取到的基因组DNA分子含量较高,可用于PCR扩增技术相关的基因研究。2.设计釉原蛋白基因特异性引物对30例3000年前人DNA样品扩增后得出准确的性别鉴定结果,完善了样本信息,为后续研究提供了便利条件。3.对西安地区出土3000年前人釉原蛋白基因高可变区扩增后测序分析,与NCBI公布的人类釉原蛋白基因序列比对后未发现任何变异,得出与进化分析相左的结果。4.对西安地区出土3000年前人与现代西安人釉原蛋白基因SNP位点rs6639060和rs2106416不同基因型出现频率进行比较,未发现显著的统计学差异。综上所述,“逆向根管技术”和Chelex-100提取法相结合是一种提取古人类牙齿DNA的可靠方法,基于古DNA技术的性别鉴定也显示出传统形态学鉴定方法所无法比拟的优越性,但西安地区出土3000年前人釉原蛋白基因多态性规律及其与釉质结构和厚度的关系还有待于我们进一步的研究。

全文目录

缩略语表  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-11
前言  11-12
文献回顾  12-28
  (一) 古 DNA 相关研究进展  12-20
  (二) 釉原蛋白基因相关研究  20-24
  (三) 单核苷酸多态性相关研究  24-28
引言  28-29
实验一古人类牙齿DNA 提取方法的建立  29-35
  1 材料  29-30
  2 方法  30-31
  3 结果  31-33
  4 讨论  33-35
实验二西安地区出土3000 年前人牙齿DNA 的提取及性别鉴定  35-42
  1 材料  35
  2 方法  35-37
  3 结果  37-39
  4 讨论  39-42
实验三西安地区出土3000 年前人釉原蛋白基因多态性研究  42-53
  1 材料  42
  2 方法  42-46
  3 结果  46-51
  4 讨论  51-53
全文总结  53-54
参考文献  54-66
个人简历和研究成果  66-67
致谢  67

西安地区出土3000年前人釉原蛋白基因的分析

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