学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

X射线及联合CCR7-siRNA对肺癌A549细胞体外增殖、侵袭及迁移能力影响

作　者: 王翠兰
导　师: 江其生；曹建平
学　校: 苏州大学
专　业: 放射医学
关键词: 肺癌 X射线 CCR7 干扰RNA 增殖 侵袭 迁移
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 29次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目的:研究不同剂量X射线照射对人肺腺癌A549细胞CCR7 mRNA及蛋白表达的影响;在此基础上,设计CCR7 mRNA的干扰RNA(CCR7-siRNA)并转染A549细胞,研究X射线照射及联合CCR7-siRNA对A549细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响,为肺癌侵袭转移发生机制的深入研究提供实验依据,为放疗联合RNA干扰技术治疗肺癌的临床应用提供新思路。方法:以Precise直线加速器产生的X射线照射体外培养的A549细胞(剂量率为442.89 cGy/min),以RT-PCR技术检测A549细胞CCR7 mRNA表达水平;以Western blotting方法检测A549细胞CCR7蛋白表达水平;以生物信息学手段,设计靶向CCR7 mRNA的干扰RNA(CCR7-siRNA),构建CCR7-siRNA慢病毒载体,转染A549细胞;以MTT法、Matrigel侵袭实验及细胞划痕法分别检测不同剂量辐射及CCR7-siRNA对A549细胞体外增殖、侵袭及迁移能力影响。结果:1.以未照射组为对照组,2 Gy组在照射后24 h及96 h A549细胞的增殖水平显著高于对照组(0.087±0.002 VS 0.075±0.001,0.449±0.009 VS 0.252±0.018,P<0.05),120 h低于对照组(0.509±0.060 VS 0.738±0.087,P<0.05);4 Gy组在照射后24 h高于对照组(0.087±0.001 VS 0.075±0.001,P<0.05),之后的增殖水平除72 h组外均低于对照组(0.088±0.008 VS 0.127±0.006,0.182±0.012 VS 0.252±0.018,0.571±0.064 VS 0.738±0.087,P<0.05);6 Gy组在照射48、72、120 h的增殖水平分别为0.072±0.002、0.138±0.030、0.365±0.024,均显著低于对照组(P<0.05);8 Gy组在照射72 h之后各组的增殖水平分别为0.155±0.038、0.139±0.015、0.248±0.016,均显著低于对照组(P<0.05)。2.以Transwell侵袭小室法检测A549细胞体外侵袭能力,对照组未见穿膜细胞,各照射组穿膜细胞数分别为22.67±3.32、1.83±0.41、3.00±1.10、4.67±2.16,与对照组相比均有统计学意义(P<0.01),以2 Gy组穿膜细胞最多(22.67±3.32,P<0.01);细胞划痕法检测体外迁移能力发现,与对照组相比,照射后24 h,2 Gy、4 Gy和6 Gy组细胞的迁移能力显著高于对照组(P<0.05),而8 Gy组显著低于对照组(P<0.05);照射后48 h,只有2 Gy组显著高于对照组(P<0.05);且2 Gy组与其它照射组间有显著差异(P<0.05)。3. A549细胞在照射4 h后,4 Gy、6 Gy和8 Gy组CCR7 mRNA及蛋白相对表达量开始升高(P<0.05);在高峰后逐渐下降,6 Gy和8 Gy组在照射72 h后mRNA表达量仍显著高于对照组(P<0.05),2 Gy和6 Gy组在照射72 h后CCR7蛋白相对表达量仍显著高于对照组(P<0.05),而4 Gy和8 Gy组在照射48 h后降至对照组水平(P>0.05)。4.以生物信息学技术设计2条靶向CCR7 mRNA的CCR7-siRNA,构建慢病毒载体转染A549细胞。与对照组比较,转染的2条CCR7-siRNA组均可显著降低A549细胞CCR7 mRNA及蛋白表达水平(0.39±0.05 VS 0.87±0.04,0.59±0.19 VS 1.00±0.00,P<0.05);设计合成的两对干扰序列相比,以CCR7 siRNA-1序列的干扰效果较为显著(0.39±0.05 VS 0.50±0.04,0.59±0.19 VS 0.93±0.07,P<0.05),用于后续实验研究。5.与单纯照射组比较,CCR7-siRNA联合照射组可显著降低CCR7 mRNA及蛋白表达水平(0.56±0.05 VS 1.20±0.20,0.32±0.06 VS 1.88±0.13,P<0.05)以及A549细胞体外增殖、侵袭、迁移能力(P<0.05)。结论:一定剂量(2 Gy -8 Gy)X射线照射A549细胞后一定时间内可显著提高A549细胞CCR7 mRNA及蛋白的表达水平并能促进A549细胞的体外侵袭、迁移,并在一定时间内抑制A549细胞的体外增殖能力;本实验所设计、筛选的CCR7-siRNA可显著降低A549细胞CCR7 mRNA及蛋白表达水平,抑制其体外侵袭、迁移能力,并可降低辐射对A549细胞体外侵袭、迁移能力的促进作用,且能协同抑制A549细胞的体外增殖能力,为放疗联合RNA干扰技术治疗肺癌的临床应用提供了新思路。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-10
引言  10-12
第一部分 不同剂量X 射线对人肺癌A549 细胞体外增殖、侵袭及迁移能力的影响  12-22
  一、实验材料  12-13
  二、实验方法  13-15
  三、实验结果  15-20
  四、讨论  20-22
第二部分 不同剂量X 射线对人肺癌A549 细胞CCR7 mRNA 及蛋白表达的影响  22-34
  一、实验材料  22-25
  二、方法  25-28
  三、实验结果  28-31
  四、讨论  31-34
第三部分 CCR7-siRNA 慢病毒载体的构建  34-47
  一、实验材料  34-36
  二、实验方法  36-41
  三、实验结果  41-45
  四、讨论  45-47
第四部分 X 射线联合CCR7-siRNA 对肺癌A549 细胞体外侵袭、迁移能力的影响  47-57
  一、实验材料  47-48
  二、实验方法  48-49
  三、实验结果  49-55
  四、讨论  55-57
结论  57-58
参考文献  58-61
综述  61-70
  参考文献  67-70
攻读学位期间公开发表的论文  70-71
中英文对照缩略词表  71-72
致谢  72-73

相似论文

  1. 非晶合金的结构和玻璃形成能力研究,TG139.8
  2. 苹果多酚对γ射线引起的免疫系统损伤防护作用研究,S661.1
  3. Pin1在骨肉瘤细胞中的表达及对细胞周期的影响,R738.1
  4. 高位精养模式日本囊对虾生长及浮游生物演替规律,S968.22
  5. 塞来昔布与β-榄香烯联合给药的抗肿瘤作用及其机制研究,R96
  6. 125I粒子植入对晚期肺癌治疗效果的临床研究,R734.2
  7. 冷却分割猪肉中腐败微生物分离鉴定与生长特性的研究,R446.5
  8. 流动人口的户籍迁移意愿及其影响因素的分析,C924.2
  9. 茉莉离体快繁体系的建立,S567.239
  10. 人源志贺菌对SPF雏鸡、鸡肠上皮原代细胞的侵袭性及肠组织CD44分子的时空性表达研究,S855.1
  11. PCV2分离株增殖特性研究及板蓝根多糖、黄芪多糖对PCV2体外复制的影响,S858.28
  12. 异丙威影响神经发育主要细胞的迁移分化及突起生长的体外研究,R329
  13. 高迁移率族蛋白B1在香烟暴露大鼠模型中的表达及其意义,R562.21
  14. 5-Aza-dC对肺癌SPC-A-1细胞p16、MGMT基因甲基化及其表达的影响,R734.2
  15. 肺癌患者癌组织和血浆p16基因甲基化的检测及去甲基化肺癌细胞生物学行为和p16基因转录的研究,R734.2
  16. Toll样受体4信号通路在脂多糖促进肺癌细胞增殖中的机制探讨,R734.2
  17. hnRNP A2/B1及p21WAF1蛋白在非小细胞肺癌中表达及意义,R734.2
  18. IL-8介导血管平滑肌细胞迁移机制及G31P的作用初探,R363
  19. 高中化学“烃的衍生物”中知识迁移的教学策略研究,G633.8
  20. 食品包装纸中有害化学物的分析测定及迁移研究,TS206.4
  21. RNAi技术抗呼吸道合胞病毒的实验研究,R725.6

中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 呼吸系肿瘤 > 肺肿瘤
© 2012 www.xueweilunwen.com