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放线菌分离方法的研究

作　者: 杨斌
导　师: 薛泉宏
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 微生物学
关键词: 放线菌分离方法微波土壤粒径羧甲基纤维素钠
分类号: Q93
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

放线菌是一类与人类生活密切相关的微生物,其在工业上具有重大的利用价值,为人类做出了巨大的贡献。目前分离出的放线菌仅占其总数的10%～20%,即传统分离方法不能分离到近80%的新的放线菌。如何有效发掘并充分利用这些尚未为人类所知的放线菌资源是当前土壤微生物学迫切需要解决的问题。本试验研究了微波预处理、土壤粒径及土壤悬液分散剂对放线菌分离效果的影响,得到以下结论:1.高有机质土样经过适度微波处理可显著增加土壤放线菌总数、链霉菌数以及小单孢菌数。处理3~15min,GA及HA培养基上放线菌总数分别较对照提高8.3%~92.6%及24.4%~108.5%;微波预处理土样对可培养放线菌的种类有明显影响,能有效提高小单孢菌等稀有放线菌的出菌率,并分离出链轮丝菌与原小单孢菌等新的稀有放线菌,处理3~24min,GA与HA培养基上新出现放线菌种类占放线菌总种类的比例为62.5%~85.7%与66.7%~83.3%。微波处理能增加拮抗性放线菌的数量,处理6、9和15min,拮抗性放线菌株数所占比例较对照分别提高66.7%、66.7%和83.3%。2.利用微波预处理风干土样时,随照射剂量增加,放线菌总数、链霉菌数呈先增后减趋势,小单孢菌数量较对照大幅度提高,其中处理3min时达到最大值,放线菌总数、链霉菌数及小单孢菌数分别较对照增加了71.3%、102.9%及212.5%。微波处理后新出现了多种不同的稀有放线菌;微波处理拮抗性放线菌的出菌率明显高于对照,处理9min时拮抗性放线菌筛出率为81.8%,新出现拮抗性放线放线菌仍以链霉菌属为主。3.微波处理新鲜土样对土壤微生物数量有一定影响。随着微波预处理土样时间的增加,细菌数量逐渐减少;真菌数量的变化呈现出减少-增加-减少的趋势,从真菌各属的区系组成来看,曲霉对微波的耐受性最好,青霉对微波的耐受性最差。微波预处理新鲜土样对放线菌总数、链霉菌数量增加的影响效果不明显,GA培养基上仅在处理3min时放线菌总数较对照增加65.0%,HA培养基上仅在处理15min时较对照增加3.5%。微波预处理新鲜土样对小单孢菌属出菌率影响较大:GA培养基上处理3min时小单孢菌属数量较对照增加92.9%,HA培养基上处理9min时小单孢菌属数量较对照增加280.0%。4.不同粒级土壤中放线菌的种类和数量不同。土壤粒径越小,放线菌数量越多,其中小单孢菌属等稀有放线菌数量增加明显;土壤有机质含量对放线菌数量与土壤粒径的关系影响不大,但培养基种类对放线菌数量、种类与土壤粒径的关系有一定影响。在GA培养基上,呈现出随着土壤粒径的减小,放线菌总数增加的趋势,其中1号高有机质草地土样放线菌总数较对照增加45.1%;在HA培养基上,放线菌总数、链霉菌数及小单孢菌数因土样的差异而不同,其中1号高有机质草地土样放线菌总数较对照增加44.0%;在黄豆粉培养基上,不同土样随着粒径减小,放线菌数量的变化有较大的差异,但黄豆粉培养基上的小单孢菌属数量占放线菌总数的比率最高。5.以适宜浓度的CMC为分散剂时,可明显增加放线菌的检出量。CMC浓度为2.5g/L时,在大部分稀释度都可以增加放线菌的数量及稀有放线菌数量,小粒径土样中放线菌总数与小单孢菌数别较对照增加130.8%及35.1%。小粒径土样中分离出的放线菌数量较大粒径土样有较大增幅,其中CMC浓度为3.0g/L时,小粒径土样中分离出的放线菌数量较大粒径土样增加61.8%。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-12
第一章文献综述  12-29
  1.1 国内外研究现状  12-16
    1.1.1 常用放线菌分离方法  12-14
    1.1.2 稀有放线菌分离方法  14-16
    1.1.3 主要存在问题及发展趋势  16
  1.2 微波应用研究简介  16-19
    1.2.1 食品、医疗器械杀菌  17
    1.2.2 浸提  17-18
    1.2.3 染色  18
    1.2.4 诱变  18
    1.2.5 刺激抗生素的分泌  18
    1.2.6 DNA 提取  18-19
    1.2.7 设施土壤灭菌  19
  1.3 土壤粒径及土壤悬液分散剂CMC  19-20
  1.4 放线菌的分类与鉴定  20-21
  1.5 拮抗性放线菌研究意义  21
  1.6 本研究目的、意义及主要内容  21-23
    1.6.1 研究的目的与意义  21-22
    1.6.2 主要研究内容及技术路线  22-23
  参考文献  23-29
第二章微波处理土样对放线菌分离效果的影响  29-45
  2.1 材料与方法  29-31
    2.1.1 材料  29-30
    2.1.2 方法  30-31
  2.2 结果与讨论  31-41
    2.2.1 微波处理对放线菌数量的影响  31-33
    2.2.2 微波处理对放线菌种类的影响  33-37
    2.2.3 微波处理对拮抗放线菌比率的影响  37
    2.2.4 微波处理对各靶标菌拮抗性影响  37-39
    2.2.5 拮抗性放线菌的拮抗特征及鉴定结果  39-41
  2.3 讨论  41-42
  2.4 结论  42-43
  参考文献  43-45
第三章微波处理新鲜土样对微生物区系的影响  45-54
  3.1 材料与方法  45-46
    3.1.1 材料  45-46
    3.1.2 方法  46
  3.2 结果与分析  46-50
    3.2.1 微波处理对微生物区系的影响  47-48
    3.2.2 微波处理对真菌区系的影响  48-49
    3.2.3 微波处理对不同培养基上放线菌区系的影响  49-50
  3.3 讨论  50-51
  3.4 结论  51-52
  参考文献  52-54
第四章微波预处理鲜样对放线菌分离效果的影响  54-68
  4.1 材料与方法  54-56
    4.1.1 材料  54-55
    4.1.2 方法  55-56
  4.2 结果与分析  56-64
    4.2.1 微波处理对放线菌分离效果的影响  56
    4.2.2 放线菌种类与数量  56-62
    4.2.3 拮抗特征与鉴定结果  62-64
  4.3 讨论  64-65
  4.4 结论  65-66
  参考文献  66-68
第五章土壤粒径对放线菌分离效果的影响  68-78
  5.1 材料与方法  68-69
    5.1.1 材料  68
    5.1.2 研究方法  68-69
  5.2 结果与讨论  69-74
    5.2.1 不同培养基上各粒径土样中放线菌数量  69-74
  5.3 讨论  74-75
  5.4 结论  75-76
  参考文献  76-78
第六章分散剂CMC 对放线菌分离效果的影响  78-88
  6.1 材料与方法  78-79
    6.1.1 材料  78
    6.1.2 研究方法  78-79
  6.2 结果与分析  79-85
    6.2.1 CMC 浓度对大颗粒土壤中放线菌数量的影响  80-82
    6.2.2 CMC 浓度对小颗粒土壤中放线菌数量的影响  82-85
  6.3 讨论  85-86
  6.4 结论  86-87
  参考文献  87-88
第七章研究结论与创新  88-93
  7.1 研究特色与创新  88
  7.2 主要结论  88-89
  7.3 研究展望  89-93
致谢  93-94
作者简介  94

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