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胎盘免疫调节因子的制备及其对CIK细胞活性影响的研究

作　者: 蒙怡
导　师: 舒雨雁
学　校: 广西医科大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 胎盘免疫调节因子 E玫瑰花环试验 CIK细胞 细胞毒 细胞增殖 超微结构 细胞表型 SELDI-TOF-MS
分类号: R714
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 55次
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内容摘要


第一部分胎盘免疫调节因子的制备及活性检测目的制备胎盘免疫调节因子(placental immunoregulatory factor,PF),并初步纯化PF和筛选活性最显著的活性组分。方法①PF的制备:将新鲜经检人胎盘去筋膜,生理盐水冲净、剪碎匀浆,反复冻融,用生理盐水透析,取透析外液,过虑除菌,分装,用Ea玫瑰花环法鉴定PF的活性。②PF初步纯化产物的制备:上样于用生理盐水的平衡好的Sephadex G-25凝胶层析柱,用Ea玫瑰花环法鉴定PF初步纯化产物的活性。结果与生理盐水的对照组相比,PF对Ea花环结合率有提高作用,其中以PF原液稀释至1/10和1/100时最显著,有统计学意义(p＜0.05),经Sephadex G-25凝胶层析柱初步纯化后,得到4组分产物,各组产物与生理盐水对照组相比,Ea花环结合率皆有显著提高,而以峰4对Ea花环结合率的促进最为明显,可以上调Ea%至未脱受体水平,有统计学意义(P＜0.05)。结论本实验成功制备了胎盘免疫调节因子,并初步纯化了PF,用Ea花环结合试验从PF初步纯化产物中筛选出了活性最显著组分---峰4。第二部分胎盘免疫调节因子对CIK细胞增殖和杀伤活性的影响目的探讨胎盘免疫调节因子(placental immunoregulatory factor,PF)对细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)的增殖和杀伤活性影响,PF对NK敏感细胞株K562(慢性粒细胞性白血病细胞)、肝细胞LO2生长的影响。方法从健康人抽取新鲜血液,诱导成CIK细胞后,设置不同浓度PF组(实验组)和只加生理盐水的对照组(对照组),观察淋巴细胞的增殖率和细胞毒活性变化;分别于生长有K562细胞和LO2细胞的96孔板中加入不同浓度PF,观察K562细胞和LO2的生长情况。结果①实验组与对照组比较,细胞增殖率和杀伤率都显著上调(P＜0.05),促增殖作用于PF稀释度为1:16时最强,而对CIK细胞活性促进作用于PF稀释度为1:32时最强。②PF在一定浓度范围内对K562细胞的生长存在抑制及杀伤作用。③PF对肝细胞LO2的生长有一定抑制,但是无细胞毒。结论本实验发现,PF可以上调CIK细胞的活性和促进CIK细胞增殖,对白血病K562细胞有抑制作用,对LO2细胞生长有调节作用。第三部分胎盘免疫调节因子对CIK细胞超微结构及免疫表型的影响目的:通过电子显微镜、流式细胞仪,观察胎盘免疫调节因子(placentalimmunoregulatory factor,PF)处理的细胞因子诱导性杀伤细胞(cytokineinducedkiller cells,CIK细胞)超微结构及免疫表型变化,以及了解PF的免疫调节活性。方法:从健康人抽取新鲜血液,诱导CIK细胞产生后,设实验组和对照组,实验组中加入一定剂量的PF诱导,对照组加入等量的生理盐水,继续培养72h。制备电镜标本,观察细胞超微结构。用流式细胞术测定CIK细胞CD4~+、CD8~+、CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+、CD25~+、HLA-DR、CD3~+CD56~+、CD80~+百分含量。结果:与对照组相比,CIK细胞超微结构变化包括:线粒体深染,溶酶体数量增加,异染色质比例增加,微绒毛肿胀及增长等。细胞表型CD4~+、CD8~+和CD3~+CD4~+细胞的百分率显著减少,CD3~+CD8~+、CD25~+、百分含量显著增加(P＜0.05)。结论:PF能够作用于CIK细胞,促使CIK细胞超微结构及表型发生变化。第四部分SELDI-TOF-MS检测胎盘免疫调节因子对CIK细胞蛋白谱的影响目的:用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)检测胎盘免疫调节因子(placental immunoregulatory factor,PF)作用后的人细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK细胞)的蛋白组变化。方法:将健康人新鲜血液诱导成为CIK细胞后,设实验组和加生理盐水的对照组继续培养72h,用表面加强激光解析电离飞行时间质谱技术(SELD-ITOF-MS)及WCX2蛋白芯片获得CIK细胞蛋白质指纹图谱,用计算机软件进行比较分析,寻找差异蛋白。结果:对照组和实验组有6个峰有显著差异(P＜0.05)以其中4个蛋白质生物标志物(M/Z分别为5636.077,6860.359,6072.814和5984.191)差异最大。结论:PF能够引起CIK细胞蛋白组变化。SELDI-TOF-MS在CIK细胞特异性蛋白质生物标志分子的筛选等方面是个较优良的方法。

全文目录


缩略语  5-6
前言  6-8
中文摘要  8-11
英文摘要  11-15
第一部分 胎盘免疫调节因子的制备及活性检测  15-25
  材料和方法  15-20
  结果  20-22
  讨论  22-24
  参考文献  24-25
第二部分 胎盘免疫调节因子对CIK细胞增殖和杀伤活性的影响  25-40
  材料与方法  25-27
  结果  27-36
  讨论  36-39
  参考文献  39-40
第三部分 胎盘免疫调节因子对cIK细胞超微结构及免疫表型的影响  40-54
  材料和方法  40-41
  结果  41-49
  讨论  49-52
  参考文献  52-54
第四部分 SELDI-TOF-MS检测胎盘免疫调节因子对CIK细胞蛋白谱的影响  54-62
  材料和方法  54-55
  结果  55-59
  讨论  59-60
  参考文献  60-62
全文小结  62-63
综述:胎盘免疫调节因子的研究进展  63-71
  正文  63-69
  参考文献  69-71
在读期间发表的相关论文  71-72
致谢  72

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