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猪瘟病毒单克隆抗体的制备及其免疫组织化学鉴定

作　者: 杨坡
导　师: 李敬玺；王选年
学　校: 河南农业大学
专　业: 基础兽医
关键词: 猪瘟病毒-SM株细胞融合单克隆抗体免疫组织化学
分类号: S858.28
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

本研究采用单克隆抗体技术,用纯化的猪瘟病毒石门毒株(Classical Swine Fever VirusSM,CSFV-SM)细胞病毒免疫BALB/C小鼠,取免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞NS0进行细胞融合,经筛选克隆后,获得了4株能够稳定分泌抗CSFV的单克隆抗体(Monoclonal antibody,McAb)的杂交瘤细胞株,分别命名为NF1,NF2,NF3,NF4。间接ELISA测定杂交瘤细胞培养上清和接种小鼠腹腔制备的腹水McAb效价,单抗NF1腹水效价为1:5000,细胞培养上清效价为1:80;单抗NF2腹水效价为1:10000,细胞培养上清效价为1:160;单抗NF3腹水效价为1:5000,细胞培养上清效价为1:80;单抗NF4腹水效价为1:5000,细胞培养上清效价为1:80。夹心ELISA中单抗对抗体捕获抗原的反应结果显示4株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体都能与捕获的猪瘟病毒表现出特异性和敏感性,而不与正常的猪、兔肾组织及其血清Ig发生交叉反应。观察杂交瘤细胞株分裂相染色体形态,染色体粗短,数目介于96～115条之间,具有杂交瘤细胞染色体特征。根据常规方法取抗原抗体达50%饱和度所相对应的单抗浓度的倒数为单抗的相对亲和力。可知单抗NF2的亲和力远高于其它3株抗体的亲和力,4株单抗的相对亲和力依次为NF2>NF3>NF1>NF4。经Pierce公司的小鼠IgG亚类间接ELISA试剂盒对单克隆抗体重链和轻链进行鉴定,NF1,NF2,NF3,NF4的IgG亚类分别为IgG1/λ,IgG2a/K,IgG2a/λ,IgG1/λ。NF2单抗在细胞免疫组化中对CSFV感染PK-15细胞表现特异结合与正常PK-15细胞无结合。组织切片免疫组化结果显示NF2单抗与侵蚀在急性猪瘟肝、肾组织小血管内皮细胞的病毒表现特异性,不与正常猪肝、肾组织发生反应。

全文目录

致谢  4-7
摘要  7-8
1 文献综述  8-29
  1.1 猪瘟的历史及危害  8
  1.2 猪瘟流行病学及病因学的研究  8-12
  1.3 猪瘟病毒的病原学特征  12-15
  1.4 猪瘟发病机理的研究进展  15-17
  1.5 CSFV的诊断及其进展  17-20
  1.6 猪瘟的预防和控制  20-21
  1.7 单克隆抗体技术的产生和发展  21-22
  1.8 猪瘟McAB的应用研究进展  22-24
  1.9 免疫组化技术的原理和优点  24-29
2 引言  29-30
3 材料与方法  30-39
  3.1 实验材料  30-31
    3.1.1 病毒  30
    3.1.2 细胞  30
    3.1.3 实验动物  30
    3.1.4 主要试剂及工具材料  30
    3.1.5 主要器材  30-31
    3.1.6 主要培养基的配置  31
    3.1.7 主要试剂的配置  31
  3.2 实验方法  31-39
    3.2.1 单克隆抗体的制备  31-37
    3.2.2 单克隆抗体的免疫组化试验  37-39
4 结果与分析  39-45
  4.1 单抗的间接ELISA效价  39
  4.2 夹心ELISA中单抗对抗体捕获抗原的反应结果  39-40
  4.3 杂交瘤细胞的染色体观察  40
  4.4 单克隆抗体的亲和力测定结果  40-41
  4.5 单抗的亚型鉴定结果  41
  4.6 培养细胞免疫组化结果  41-42
  4.7 组织切片免疫组化结果  42-45
5 讨论与结论  45-52
  5.1 讨论  45-51
  5.2 结论  51-52
参考文献:  52-59
ABSTRACT  59

猪瘟病毒单克隆抗体的制备及其免疫组织化学鉴定

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