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细胞增殖相关基因NYD-SP15在人视网膜色素上皮细胞中的表达定位与功能研究

作　者: 刘锦
导　师: 刘庆淮
学　校: 南京医科大学
专　业: 眼科学
关键词: NYD-SP15 细胞增殖 ARPE19 增生性玻璃体视网膜病变
分类号: R774.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

目的：研究细胞增殖相关基因NYD-SP15在人视网膜色素上皮细胞ARPE19中的表达及对ARPE19细胞增殖的影响，以进一步探讨NYD-SP15在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)发生和发展过程中的作用机制。方法：采用基因重组技术构建荧光表达载体pEGFP-C1-NYD-SP15和真核表达载体pcDNA3.1-myc-NYD-SP15，质粒经PCR和测序分析鉴定后，用脂质体转染法转染ARPE19细胞，观察GFP-NYD-SP15融合蛋白在ARPE19细胞的表达定位，流式细胞仪测定NYD-SP15转染后对ARPE19细胞生长周期、凋亡的影响。结果：经PCR和测序分析鉴定，成功地构建了荧光表达载体pEGFP-C1-NYD-SP15和真核表达载体pcDNA3.1-myc-NYD-SP15。GFP-NYD-SP15融合蛋白亚细胞定位显示，NYD-SP15低表达于ARPE19细胞胞浆，高表达于细胞核；pcDNA3.1-myc-NYD-SP15瞬时转染ARPE19细胞显示24小时细胞无明显改变，48小时后重组质粒转染组S期细胞占细胞总数的19.37％，pcDNA3.1-myc空载质粒转染组S期细胞占10.87％，而空白对照组S期细胞占3.33％，重组质粒转染组与两对照组之间的差异有统计学意义(P＜0.01)。结论：生物信息学分析显示NYD-SP15蛋白是胞苷脱氨酶家族的成员之一，与人的其它脱氨酶不同，它具有两个dCMP_cvt_deam结构域。进化分析显示，N端的结构域起源于胞苷脱氨酶(CDA)，C端的结构域起源于脱氧胞苷酸脱氨酶(dCMP)。因此，NYD-SP15具有脱氨酶相关蛋白的功能。流式细胞仪检测结果显示NYD-SP15能够促使ARPE19细胞从G1期进入S期，促进DNA的合成，进而促进ARPE19细胞的增殖，这一结果与其结构功能域dCMP_cyt_deam的功能是相一致的。提示NYD-SP15在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)发生和发展过程中可促进DNA的合成，引起细胞增生。本研究为该基因的功能研究奠定了基础，并为PVR的基因治疗开辟了一条新的治疗途径。

全文目录

一、中文摘要  3-5
二、英文摘要  5-8
三、前言  8-11
四、材料与方法  11-19
五、结果  19-23
六、分析与讨论  23-30
七、小结  30-31
八、参考文献  31-35
九、附图  35-51
十、致谢  51-53
十一、综述  53-66
十二、综述参考文献  66-74

细胞增殖相关基因NYD-SP15在人视网膜色素上皮细胞中的表达定位与功能研究

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