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白念珠菌双形态性的影响因素的研究

作　者: 苏惠春
导　师: 程波；张声
学　校: 福建医科大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 白念珠菌双形态性 mRNA 窄谱中波紫外线 HWP1 HYR1 HGC1 EFG1
分类号: R379
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

目的：探讨白念珠菌双形态性形成的相关影响因素，寻找控制菌丝形成的关键基因。方法：1、分离培养八株不同来源的白念珠菌(标准菌株和临床标本分离菌株)，控制白念珠菌菌丝生长的影响因素，包括孢子浓度、培养温度、培养基成分和pH值，观察菌丝的生长特点和形成率的变化。2、分别采用-80℃研磨、液氮研磨、酸洗玻璃珠三种破壁方法破壁，用TRIzol试剂提取白念珠菌菌丝相和酵母相的总RNA，对提取的RNA进行定性定量及完整性分析。3、通过设置内参的半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法测定白念珠菌双形态性的四个相关调控基因EFG1、HWP1、HYR1、HGC1的mRNA在菌丝相和酵母相中的表达差异。4、将八株白念珠菌分别接种在显色培养基和玉米吐温培养基上，用NB-UVB临床照射剂量(0.4-3.0J／cm~2)对其进行3次／天，共7天的照射，观察菌丝和酵母的生长及形态变化。结果：1、菌丝具有聚集生长成絮状物的特点。在pH=5.0时，菌丝上的孢子易脱落；在pH=9.0时，易形成较大分生孢子；中性pH值最有利于纯菌丝的生长。孢子浓度5×10~6／ml，在含10％胎牛血清pH7.0的PRMI1640培养基中，38℃静置培养4到8小时，菌丝的形成效果好。菌丝纯度大于95％。2、三种破壁方法提取白念珠菌酵母相RNA的浓度(x±s，ug／ul)分别为：-80℃研磨法(0.464±0.101，ug／ul)、酸洗玻璃珠法(0.911±0.413，ug／ul)、液氮研磨法(1.418±0.524，ug／ul)。而且后两者RNA的完整性比前者好。3、HWP1和HGC1基因在菌丝相有表达，而在酵母相无表达。EFG1和HYR1基因在菌丝相和酵母相的表达没有明显差异。4、随着UVB照射剂量的增加，菌丝形成逐渐减少，菌丝上生长的分生孢子逐渐增多。照射剂量超过1.5J／cm~2念珠菌的生长受到明显抑制。结论：1、血清、中性pH值、适当温度有利于菌丝生长。2、液氮研磨破壁和酸洗玻璃珠振荡破壁为较好的破壁提取白念珠菌RNA的方法，其中液氮研磨法最好。3、NB-UVB照射剂量在0.4—3.0J／cm~2的时候，可抑制菌丝生长。4、HWP1和HGC1基因为菌丝特异表达基因。

全文目录

一.缩略语表  4-5
二.中文摘要  5-7
三.英文摘要  7-9
四.引言  9-11
五.材料和方法  11-18
六.结果  18-31
七.讨论  31-35
八.结论  35-36
九.该课题完成的文章  36-37
九.参考文献  37-40
十.致谢  40-41
十一.综述  41-48

白念珠菌双形态性的影响因素的研究

内容摘要

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