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HL07，RhoA蛋白小分子抑制剂舒张血管作用及机制的研究

作　者: 张彦
导　师: 缪丽燕
学　校: 苏州大学
专　业: 药剂学
关键词: 化合物HL07 RhoA/ROCK通路 RhoA蛋白活性 RhoA mRNA 血管舒张
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

化合物HL07是本课题组前期综合运用计算机虚拟筛选、化学合成,并运用分子生物学、结构生物学等方法,筛选出的新一代RhoA蛋白小分子抑制剂之一。目的:1)考察化合物HL07对SD大鼠离体预收缩血管条的影响;2)探讨化合物HL07舒张血管条的可能机制;3)考察化合物HL07对大鼠蛛网膜下腔(subarachnoid hemorrhage, SAH)出血后脑血管痉挛(cerebral vasospasm, CVS)的作用,以期找到HL07作用的疾病模型。方法:1)采用SD大鼠离体血管条实验方法观察HL07引起的预收缩血管条的张力变化;2)培养人脑血管平滑肌细胞(the human cerebrovascular smooth muscle cells, HBVSMCs),采用G-LISA方法、竞争RT-PCR方法检测HL07预处理的HBVSMCs中RhoA蛋白活性及RhoA mRNA表达水平的变化;3)采用视交叉池二次注血法制作大鼠SAH-CVS动物模型,实验随机分为5组:正常对照组、SAH模型组、SAH模型组+Fasudil、SAH模型组+HL07、SAH模型组+DMSO,每组9只,比较各组大鼠基底动脉(basilar artery, BA)细胞形态学及内径周长的差异。结果:1)HL07(0~180μM)对100nM苯肾上腺素(phenylephrine, PE)预收缩的离体去内皮胸主动脉(thoracic aorta, TA)血管条呈现浓度依赖的明显舒张作用,IC50=156.93μM,而对60mM的KCl预收缩的血管条舒张作用不明显;且在硝苯地平/毒胡萝卜内酯(nifedipine/thapsigargin, Nif/TSG)孵育下,HL07对100nM PE预收缩的TA血管条较无Nif/TSG孵育的情况下,呈现更明显的舒张作用(P<0.05),IC50=149.52μM;另外,HL07在肺动脉(pulmonary artery, PA)血管条上较TA血管条上表现更明显的舒张作用(P<0.05),IC50=134.97μM;2)HL07在一定的浓度下,有效的抑制了PE诱导的RhoA蛋白激活作用(P<0.05)(0.25、2.0、10.0μM时抑制率分别为:30.88±5.77%、41.87±7.19%、64.09±4.83%,各浓度组间的抑制率差异有统计学意义(P<0.05));而HL07处理下,RhoA mRNA表达水平呈现下降趋势,但无统计学意义(P>0.05);3)大鼠SAH-CVS动物模型实验中,各组血管内径周长比较:SAH模型组(215.14±19.33μm)较正常对照组(269.80±13.12μm)减小,其差异有统计学意义(P<0.05);SAH模型组与SAH模型组+DMSO(222.93±16.10μm)之间差异无统计学意义(P>0.05);SAH模型组+HL07(269.68±33.61μm)较SAH模型组增大,其差异有统计学意义(P<0.05),与SAH模型组+Fasudil(264.78±14.90μm)差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1)HL07对PE预收缩的血管条有显著的舒张作用;2)HL07对PE预收缩血管的舒张作用的发挥可能是依赖于阻断RhoA/ROCK通路中RhoA蛋白活性的增强,而不是影响RhoA mRNA表达水平的变化;3)HL07对大鼠脑血管痉挛有缓解作用。本实验结果提示:小分子化合物HL07具有抑制生物活性物质引起血管收缩的作用;对RhoA蛋白活性的抑制作用可能是其扩血管作用的机制之一。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-9
引言  9-15
  一、研究背景  9-10
  二、研究基础  10-12
  三、课题内容及意义  12
  参考文献  12-15
第一章化合物HL07 对大鼠离体血管条平滑肌的舒张作用  15-31
  第一节血管条实验方法学考察  15-20
  第二节 HL07 对大鼠离体血管条平滑肌的舒张作用  20-29
  参考文献  29-31
第二章化合物HL07 在血管平滑肌中发挥舒张作用的分子机制研究  31-52
  第一节对人脑血管平滑肌细胞中 RhoA 蛋白活性的影响  31-39
  第二节对人脑血管平滑肌细胞中 RhoA mRNA 表达量的影响  39-51
  参考文献  51-52
第三章化合物HL07 对大鼠脑血管痉挛模型的缓解作用  52-58
  参考文献  57-58
本研究工作创新点  58-59
未来研究工作展望  59-60
综述  60-67
  参考文献  63-67
缩略词表  67-68
攻读学位期间公开发表的论文  68-69
致谢  69-70

HL07，RhoA蛋白小分子抑制剂舒张血管作用及机制的研究

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