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SjFer与GM-CSF融合表达载体的构建及其诱导小鼠免疫保护力的研究

作　者: 陈尔曼
导　师: 黄复深
学　校: 湖南农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 日本血吸虫铁蛋白基因粒细胞集落刺激因子(GM-CSF) 核酸疫苗免疫保护力小鼠
分类号: S852.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 21次
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内容摘要

日本血吸虫病是一种分布很广的、严重危害人畜健康的人畜共患寄生虫病。日本血吸虫疫苗是血吸虫病防治研究的重要领域，经过几十年的研究已取得了一定的成绩，但是现有疫苗候选分子诱导的免疫保护力均较低，有必要探讨如何提高现有疫苗候选分子的免疫效果。佐剂是提高核酸疫苗免疫保护力的重要途径，因此，本研究构建SjFer与粒细胞集落刺激因子（GM-CSF）融合表达载体，以探讨GM-CSF对核酸疫苗pcDNA3.0/SjFer免疫保护力的影响。根据GenBank中的SjFer基因序列设计特异性引物一对，以日本血吸虫cDNA文库为模板PCR扩增SjFer基因，常规方法构建pcDNA3.0/SjFer、pcDNA3.0/GM-CSF及pcDNA3.0/SjFer-GM-CSF。以雌性昆明小鼠为实验动物，85只，随机分5组，每组17只，分别接种生理盐水（A组）、pcDNA3.0（B组）、pcDNA3.0/GM-CSF（C组）、pcDNA3.0/SjFer（D组）及pcDNA3.0/SjFer-GM-CSF（E组）。于0，2，4周通过左后肢股四头肌每只每次注射纯化质粒50μg（生理盐水为50μl）。每次免疫前和感染前采血收集血清，ELISA检测血清内特异性IgG水平。末次免疫后2周每组随机宰杀5只小鼠无菌取脾，MTT法检测淋巴细胞增殖情况，并取左后肢股四头肌作免疫组化以检查重组质粒在小鼠肌细胞内的表达情况。末次免疫后两周每只小鼠经腹部感染40±1条尾蚴，45天后宰杀冲虫，计算减虫率和减卵率。结果显示：pcDNA3.0／GM-CSF、pcDNA3.0／SjFer及pcDNA3.0／SjFer-GM-CSF能在小鼠肌细胞内的表达，D组和E组可诱导小鼠IgG抗体水平升高，且E组IgG抗体水平高于D组。攻击感染前的淋巴细胞转化试验结果显示，D组和E组的脾淋巴细胞的转化率明显增加，与对照组差异显著，且E组的OD₅₇₀值明显高于D组。pcDNA3.0／SjFer和pcDNA3.0／SjFer-GM-CSF诱导小鼠分别产生36.27％和39.22％的减虫率、36.10％和49.04％的减卵率。可见，GM-CSF可增强体液和细胞免疫应答并显著增强pcDNA3.0／SjFer的免疫保护力。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-7
第一章前言  7-14
第二章 SjFer与GM-CSF融合表达载体的构建及其体内表达  14-27
  1 材料与方法  14-21
  2 结果与分析  21-26
  3 讨论  26-27
第三章 SjFer与GM-CSF融合表达重组质粒诱导小鼠抗攻击感染保护力的研究  27-35
  1 材料与方法  27-30
  2 结果与分析  30-32
  3 讨论  32-35
结论  35-36
参考文献  36-43
附录1:主要试剂配制  43-48
附录2:英文缩写词表  48-49
致谢  49-50
作者简介  50-51

SjFer与GM-CSF融合表达载体的构建及其诱导小鼠免疫保护力的研究

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