学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

农杆菌介导AtNHX1基因转化蓝浆果的研究

作　者: 耿其芳
导　师: 章镇
学　校: 南京农业大学
专　业: 果树学
关键词: 蓝浆果 AtNHX1基因农杆菌介导遗传转化
分类号: S663.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
下　载: 77次
引　用: 2次
阅　读: 论文下载

内容摘要

本实验建立了高丛蓝浆果(Vaccinium corymbosum L.)的两个品种伯克利和蓝丰的高效再生体系和农杆菌介导的遗传转化体系，并采用农杆菌介导法将AtNHX1基因转入蓝丰，以获得携带AtNHX1基因的蓝浆果新种质．研究结果如下： 1．研究了蓝浆果的两个品种伯克利和蓝丰的高效快繁体系，比较研究发现，其扩繁效果以改良1/2MS培养基为基础培养基，伯克利在2iP 10 mg/L时增殖率达到90.0％，蓝丰在2iP5mg/L时增殖率为86.7％。蓝丰在IBA为0.1mg/L时生根率为66.7％，而伯克利在0.1mg/L生根率为33.7％。蓝丰在IBA0.1mg/L+NAA0.1mg/L的生根率也达到45.5％。 2．通过研究基础培养基的类型、激素种类和浓度、暗培养时间、再生叶片节位、叶片放置方式等因素对蓝浆果叶片再生频率的影响，以改良1/2MS为基本培养基ZR为5mg/L的蓝丰的叶片再生率达到96％，伯克利达到100％。在2iP为5-20 mg/L、TDZ5-15mg/L和BA5-20mg/L时再生效果不如ZR为5mg/L。刚展开的1-2节位的叶片，不经过暗培养，蓝丰叶片的再生频率最高。 3．通过对蓝丰叶片侵染时间、共培养时间、抑菌素种类和浓度、不同选择压等遗传转化影响因素的研究，建立的蓝浆果遗传转化体系为：经农杆菌侵染5分钟，共培养3天，在含ZT 5mg/L、250mg/L Cef和Km10mg/L的改良1/2MS培养基上，经过2-3次的继代筛选，获得抗性芽。 4．对农杆菌介导法获得的蓝丰抗性芽进行GUS染色、PCR、PCR-Southem bolt等检测，证实AtNHX1基因已经整合到蓝浆果的基因组中。

全文目录

原创性声明  3-4
摘要  4-5
英文摘要(Abstract)  5-6
目录  6-9
缩略语表  9-10
第一章文献综述  10-33
  1 蓝浆果研究进展  10-19
    1.1 蓝浆果的保健作用  10-11
    1.2 蓝浆果的植物学特征  11
    1.3 蓝浆果的种类  11-12
    1.4 蓝浆果分布及国内外生产概况  12-13
      1.4.1 蓝浆果的分布  12
      1.4.2 国内外蓝浆果的生产概况  12-13
    1.5 蓝浆果的生态适应性  13-14
      1.5.1 气候条件  13
      1.5.2 土壤要求  13-14
    1.6 蓝浆果的繁殖  14-16
      1.6.1 播种  14
      1.6.2 扦插  14
      1.6.3 组织培养  14-16
      1.6.4 其他繁殖方法  16
    1.7 蓝浆果的育种  16-19
      1.7.1 良种选育  16-17
      1.7.2 远缘杂交  17
      1.7.3 基因工程育种  17-19
    1.8 我国发展蓝浆果的问题与对策  19
  2 植物耐盐性的分子生物学研究进展  19-27
    2.1 植物耐盐的生理生化机制  20-22
      2.1.1 耐离子胁迫机制  20-21
      2.1.2 耐渗透胁迫机制  21
      2.1.3 程序性死亡调节机制  21
      2.1.4 转录因子调节机制  21-22
    2.2 耐盐基因在植物中的遗传转化  22-27
  3 植物Na+／H+逆向转运蛋白研究进展  27-32
    3.1 Na+／H+逆向转运蛋白的发现及其功能  27-29
      3.1.1 Na+／H+逆向转运蛋白的发现  27-28
      3.1.2 Na+／H+逆向转运蛋白的功能  28-29
    3.2 Na+／H+逆向转运蛋白与植物耐盐性的关系  29-30
    3.3 Na+／H+逆向转运蛋白的分子生物学  30-32
      3.3.1 Na+／H+逆向转运蛋白基因的克隆  30-31
      3.3.2 Na+／H+逆向转运蛋白基因的表达调控  31
      3.3.3 Na+／H+逆向转运蛋白基因产物的分析  31-32
  4 AtNHX1基因的遗传转化应用现状及展望  32-33
第二章蓝浆果茎段培养和叶片再生体系的建立  33-43
  1 材料与方法  33-36
    1.1材料与方法  33-35
      1.1.1 植物材料  33
      1.1.2 培养基  33-35
    1.2 方法  35-36
      1.2.1 无菌苗的获得  35
      1.2.2 试管苗的快速繁殖  35
      1.2.3 蓝浆果再生体系的建立  35-36
  2 结果与分析  36-41
    2.1 不同品种在不同培养基上的反应  36-37
    2.2 不同品种在2iP不同浓度下的增殖  37
    2.3 不同品种在不同激素中的生根反应  37-38
    2.4 不同激素的不同浓度对不同基因型叶片再生的影响  38-39
    2.5 不同叶片节位对叶片再生的影响  39-40
    2.6 叶片的完整性对叶片再生的影响  40
    2.7 叶片的放置方式对叶片再生的影响  40
    2.8 暗培养对叶片再生的影响  40-41
  3 讨论  41-43
第三章蓝浆果的遗传转化体系的建立  43-52
  1 材料与方法  43-47
    1.1 材料  43-46
      1.1.1 植物材料  43
      1.1.2 菌株和质粒  43-46
      1.1.3 细菌培养基与培养液  46
    1.2 方法  46-47
      1.2.1 农杆菌的培养、活化  46
      1.2.2 根癌农杆菌对外植体的侵染与共培养  46
      1.2.3 卡那霉素选择压的确定  46-47
      1.2.4 农杆菌侵染时间的确定  47
      1.2.5 共培养时间的对叶片转化再生的影响  47
      1.2.6 抑菌抗生素对叶片转化再生的影响。  47
  2 结果与分析  47-50
    2.1 Km选择压的确定  47-48
    2.2 农杆菌侵染时间的确定  48-49
    2.3 共培养时间对转化再生的影响  49
    2.4 抑菌抗生素对蓝丰叶片转化再生的影响  49-50
  3 讨论  50-52
第四章 AtNHX1基因转化蓝浆果转基因植株的检测  52-61
  1 材料与方法  52-58
    1.1 材料  52-53
      1.1.1 植物材料  52
      1.1.2 菌株的性质  52
      1.1.3 试剂  52-53
    1.2 方法  53-58
      1.2.1 植物基因组DNA的提取及纯化  53-54
      1.2.2 LBA4404质粒DNA的提取(醋酸铵法)  54
      1.2.3 GUS染色  54
      1.2.4 PCR检测  54-55
      1.2.5 转基因植物的Southern blot检测  55-58
  2 结果分析  58-60
    2.1 抗性植株的GUS染色  58
    2.2 转基因蓝浆果PCR特异扩增检测  58-59
    2.3 转基因蓝浆果PCR产物的Southern杂交分析  59-60
  3 讨论  60-61
参考文献  61-67
插图  67-69
致谢  69

农杆菌介导AtNHX1基因转化蓝浆果的研究

内容摘要

全文目录

相似论文