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传染性法氏囊病病毒的分子生物学快速鉴别诊断技术的研究

作　者: 龙进学
导　师: 韦平；李康然
学　校: 广西大学
专　业: 预防兽医学
关键词: IBDV RT-PCR Nested-PCR 快速诊断病毒分离限制性酶切分析型特异性引物
分类号: S852.65
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
下　载: 202次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载

内容摘要

鸡传染性法氏囊病是造成鸡群机体免疫抑制，导致鸡群疾病复杂多变的主要因素，其中vvIBDV和vIBDV危害尤为严重。建立一种能对IBDV不同致病型进行快速鉴别诊断的实用技术是该病防制的关键所在。首先，研究根据已发表的IBDV各致病型毒株的序列，在病毒结构蛋白VP2编码基因的高变区(VP2 variable domain，vVP2)两端外侧的保守序列内设计合成了2条寡核苷酸引物，对各种不同致病型的12株参考毒株进行逆转录酶—聚合酶链式反应(RT-PCR)的检测。结果12个参考毒株均能扩增出约679bp的目的片段，而阴性对照的常见5种鸡病病原：鸡新城疫病毒(NDV)、鸡传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡传染性贫血病毒(CAIV)、大肠杆菌和多杀性巴氏杆菌均没有扩增到任何片段；应用建立的技术对疑似IBD的34份临床病料进行检测，并同时在基础RT-PCR扩增的片段内设计另一对引物进行Nested-PCR。结果基础RT-PCR方法检测到其中11份病料为阳性，Nested-PCR则检测到23份阳性。研究的结果表明建立的IBD的RT-PCR诊断技术具有特异、快捷和敏感的特点。在此基础上设计的Nested-PCR则大大提高了阳性检出率(提高52.1％)。为IBD临床快速诊断提供了一种有用而可靠的新技术。另外，建立的基础RT-PCR和Nested-PCR对各种IBD疫苗免疫鸡后不同时间进行检测(接种后3、4、6、9、15天)，未能检测到相关的疫苗病毒，说明研究建立的方法在临床检测上是否为IBDV野毒的感染具有一定的实用性。同时，应用经典的病毒分离方法：鸡胚绒膜尿囊膜(CAM)和鸡胚成纤维细胞(CEF)对PCR技术检测为阳性的23份病料进行病毒分离，结果分离到11株IBDV。第二，本研究的基础RT-PCR和Nested-PCR所扩增的片段均是横跨IBDV的vVP2的，所以，可直接对PCR产物进行酶切分型研究。选用具有分型意庐卢人耸2003 届硕十学位论文2义的两种限制性内切酶（SaCI和 SsPI）建立的 REA，对 5株属于 CIBDV的疫苗株和 6株标准强毒株；属于 VVIBDV的毒株 GX、YLI、YLZ和 YLZ等分离毒：属于叶＊＊V的美国变异E株进行酶切分析，结果与前人的研究相符。另外，针对不同强弱毒株的1＊＊V的＊PZ高变区序列的差异：设计合成了vvIBDV的型特异性引物（＊IBDa＋vvIBDs人建立型特异的RT－PCR，只需一次反应即可区分 CIBDV和 VVIBDV。第三，应用本研究建立的REA和 VVIBDV型特异性RTPCR技术，对34份采自广西不同地区的IBDV病料，其中PCR反应阳性的23份的PCR产物，进行酶切分型和特异性引物扩增。结果发现 1993年至 2003年的病料或分离的毒株中，有 8株确定为 VVIBDV，13株踊定为 CIBDV，另外，有两株不能确定。

全文目录

中文摘要  3-5
英文摘要  5-7
目录  7-8
前言  8-10
文献综述  10-22
实验研究  22-45
  之一 IBDV的RT-PCR 快速诊断技术的建立  22-35
  之二传染性法氏囊病病毒不同致病型的鉴别  35-45
结论  45-46
致谢  46-47
攻读学位期间发表的学术论文  47
个人简介  47

传染性法氏囊病病毒的分子生物学快速鉴别诊断技术的研究

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