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松材线虫携带细菌与松材线虫的关系及其致病作用研究

作　者: 池树友
导　师: 韩正敏
学　校: 南京林业大学
专　业: 森林保护学
关键词: 松材线虫病松材线虫拟松材线虫致病细菌致病性黑松
分类号: S763.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
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内容摘要

本文对松树上不同线虫携带细菌的种类和能力进行了比较，初步探讨了线虫与细菌的相互关系，进一步阐明了细菌在松树萎蔫过程中的重要作用。主要研究结果如下： 1．不同线虫携带细菌的种类存在差异。从松材线虫虫体上分离到荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)和栖稻黄色单胞菌(Flavimonas oryzihabitans)，其中荧光假单胞菌占分离到的菌落总数的80％，可以看作是松材线虫携带的主要细菌。从拟松材线虫(Bursaphelenchus mucronatus)虫体上分离到嗜麦芽寡养食单孢菌(Xanthomonas maltophilia)和香味菌属某种。从小杆线虫(Rhabditida)体上分离到产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)和鲍氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii)。腐生性滑刃属线虫(Aphelenchoides sp．)虫体上分离到的菌株被鉴定为嗜麦芽寡养食单孢菌(Xanthomonas maltophilia)，与拟松材线虫体上的优势菌种相同。松材线虫携带的细菌种类与其它线虫体表的细菌种类明显不同。 2．产毒测定表明，松材线虫携带的主要细菌—荧光假单胞菌毒性最强，从小杆线虫体上分离到的产气肠杆菌没有任何毒性，其余的菌株均具有不同程度的毒性。 3．室内接种实验表明，单独接种无菌松材线虫、无菌拟松材线虫、无菌水稻干尖线虫不能使黑松无菌苗萎蔫，而将荧光假单胞菌与无菌松材线虫、无菌拟松材线虫、无菌水稻干尖线虫混合接种，均可引起黑松无菌苗萎蔫和愈伤组织严重褐变。这表明细菌在松苗萎蔫和愈伤组织褐变过程中起了重要作用。 4．活线虫的存在有利于细菌的繁殖。在供试的松材线虫、拟松材线虫、滑刃线虫和小杆线虫中，松材线虫对细菌繁殖的促进作用最为显著。细菌对松材线虫的繁殖也具有显著促进作用。在无菌松材线虫中加入荧光假单胞菌，极大地增强了线虫的繁殖能力。在相同的时间和培养条件下，其繁殖能力比无菌松材线虫的繁殖能力高出许多，证明了细菌和松材线虫之间是互利互惠的。 5．无菌松材线虫体表附着细菌的数量约为250CFU，明显高于拟松材线虫、滑刃线虫和小杆线虫。无菌拟松材线虫、无菌滑刃线虫和无菌小杆线虫体表附着细菌数量分别为154、117和50CFU。 6．松材线虫体表具有一层粘液状多糖物质。经测定每万条松材线虫体表可溶性多糖含量为59.17μg，明显高于其它几种供试线虫。拟松材线虫、滑刃线虫和小杆线虫每万条线虫体表可溶性多糖含量分别为41.5、34.01和25.26μg。 7．野外用无菌松材线虫接种10年生黑松，接种9个月后，对照株全部发病；接种无菌松材线虫的8株中有5株仍保持健康。从健康株中能分离到松材线虫，而分离不到细菌。从发病的3棵松树上可分离到大量线虫和细菌，证明必须要在细菌的存在下松材线虫才能致病。

全文目录

前言  9-10
上篇文献综述  10-19
  第一章松材线虫病的学位论文">松材线虫病致病机理的研究进展  11-17
    1 松材线虫病的病理生理学和组织病理学  11-12
    2 生化因子与松材线虫病的关系  12-17
      2.1 酶  12-13
      2.2 毒素  13-14
      2.3 与松材线虫病有关的微生物及其致病作用  14-15
      2.4 松材线虫携带细菌的种类和方式  15-16
      2.5 拟松材线虫的致病性  16-17
  第二章病原线虫与细菌共同构成的植物侵染病害  17-19
下篇研究报告  19-58
  第一章线虫携带细菌的分离与毒性测定  20-29
    1 材料与方法  20-22
      1.1 线虫的分离、纯化与培养  20
      1.2 线虫的鉴定  20
      1.3 细菌的分离、纯化与保存  20-21
      1.4 细菌培养原液的毒性测定  21
      1.5 毒素原液热稳定性测定  21-22
    2 结果与分析  22-27
      2.1 线虫分离和鉴定结果  22
      2.2 细菌分离结果  22-23
      2.3 细菌培养原液的毒性测定  23
      2.4 毒素原液热稳定性测定  23-27
    3 小结与讨论  27-29
  第二章线虫携带细菌的鉴定  29-34
    1 材料与方法  29-30
      1.1 细菌的来源  29
      1.2 鉴定方法  29-30
    2 结果与分析  30-31
      2.1 培养性状  30
      2.2 革兰氏染色和氧化酶反应  30
      2.3 仪器鉴定  30-31
    3 小结与讨论  31-34
  第三章不同线虫与细菌结合的致病性  34-43
    1 材料与方法  34-36
      1.1 细菌的来源  34
      1.2 线虫的无菌化处理与培养  34
      1.3 无菌苗的培育  34
      1.4 愈伤组织的培育  34
      1.5 接种实验  34-35
      1.6 接种后的再分离  35-36
    2 结果与分析  36-41
      2.1 黑松无菌苗接种及再分离  36
      2.2 黑松愈伤组织接种  36-41
    3 小结与讨论  41-43
  第四章线虫与细菌的相互关系研究  43-52
    1 材料与方法  43-44
      1.1 不同线虫对细菌繁殖的影响  43
      1.2 细菌对松材线虫繁殖的影响  43-44
      1.3 细菌对线虫的附着能力  44
      1.4 线虫体表电镜观察  44
    2 结果与分析  44-50
      2.1 不同线虫对细菌繁殖的影响  44
      2.2 细菌对松材线虫繁殖的影响  44
      2.3 细菌对不同线虫的附着能力  44-47
      2.4 线虫体表电镜观察  47-50
    3 小结与讨论  50-52
  第五章线虫体表可溶性多糖含量的测定  52-55
    1 材料与方法  52-53
      1.1 使用的线虫种类  52
      1.2 线虫体表可溶性多糖的萃取  52
      1.3 线虫体表可溶性多糖含量的测定  52-53
    2 结果与分析  53-54
    3 小结与讨论  54-55
  第六章无菌松材线虫对10年生黑松致病性测定  55-58
    1 材料与方法  55-56
      1.1 松材线虫的无菌化处理与培养  55
      1.2 野外接种  55
      1.3 接种后的再分离  55-56
    2 结果与分析  56
      2.1 发病结果检查  56
      2.2 再分离结果  56
    3 小结与讨论  56-58
总结与讨论  58-60
参考文献  60-66

松材线虫携带细菌与松材线虫的关系及其致病作用研究

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