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稻瘟菌蛋白激发子分离纯化及生物活性

作　者: 孙义军
导　师: 李晓刚；胡昌弟
学　校: 湖南农业大学
专　业: 农业推广
关键词: 稻瘟菌激活蛋白生物活性诱导抗性
分类号: S435.111.41
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

采用沸水浴、离心、硫酸铵沉淀、阴离子交换层析等方法,从稻瘟病菌Magnaporthe grisea菌丝体中分离纯化出一种激活蛋白,经SDS-PAGE银染显示呈单一条带,相对分子量约为36 kD,等电点测定此蛋白为酸性蛋白。稻瘟菌激活蛋白在植物促生方面具有显著作用。能提高水稻种子的发芽率,其中,2.5μg/ml浓度的激活蛋白对发芽率的促进作用最为显著；可促进水稻幼苗的生长,各浓度梯度中尤以5μg/mL的促生作用最为明显。植物体内叶绿素含量直接影响光合作用的效果,实验发现,经激活蛋白喷施后的水稻幼苗体内的叶绿素a和叶绿素b的含量要高于对照,证明稻瘟菌激活蛋白可促进叶绿素含量的增加,从而增强其光合作用。稻瘟菌激活蛋白还可诱导植物产生抗性,对水稻的抗旱性和抗低温具有很好的效果,激活蛋白处理的水稻幼苗的抗旱综合系数、叶片抗衰度以及存活率相对对照都有不同程度的提高；抗低温作用比对照也要高,且10μg/mL浓度处理组的株高增高效果最为显著；10μg/mL该激活蛋白第8、15、22 d时对番茄稻瘟菌的诱抗效果可达为76.40%-84.49%。番茄幼苗叶片的苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)活性均有不同程度提高,说明防御相关酶活性的提高,是激活蛋白诱导水稻稻瘟病的主要生理机制之一。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
1 前言  8-13
  1.1 过敏蛋白  8-9
  1.2 隐地蛋白  9
  1.3 激活蛋白  9-12
  1.4 其它蛋白  12
  1.5 发展前景  12-13
2 材料与方法  13-25
  2.1 实验仪器  13
  2.2 实验试剂  13-14
  2.3 实验材料  14
  2.4 稻瘟菌菌丝体的培养  14
  2.5 粗蛋白的提取  14
  2.6 硫酸铵分级沉淀  14
  2.7 蛋白质含量的测定  14-16
  2.8 激活蛋白的活性检测  16
  2.9 激活蛋白的纯化  16
  2.10 SDS-PAGE法检测蛋白的纯度并测定分子量  16-17
  2.11 蛋白质等电点的测定  17-20
  2.12 稻瘟菌蛋白激发子浓度测定  20
  2.13 激活蛋白对水稻幼苗生长的影响  20-21
  2.14 激活蛋白对水稻、番茄抗性的诱导作用  21
  2.15 激活蛋白对水稻、番茄生理生化指标的影响  21-25
3 结果与分析  25-33
  3.1 稻瘟菌在固体培养基上的培养  25
  3.2 稻瘟菌在液体培养基中的培养  25-26
  3.3 稻瘟菌激活蛋白的分离纯化及检测  26-28
  3.4 蛋白质等电点的测定  28
  3.5 稻瘟菌激活蛋白对水稻种子发芽率的影响  28
  3.6 稻瘟菌蛋白激发子对水稻幼苗生长的影响  28-29
  3.7 稻瘟菌蛋白激发子对水稻抗旱性的影响  29
  3.8 稻瘟菌蛋白激发子对水稻抗低温的影响  29
  3.9 稻瘟菌蛋白激发子对番茄抗病性影响  29
  3.10 稻瘟菌激活蛋白对水稻叶片叶绿素含量的影响  29-31
  3.11 激活蛋白对番茄叶片苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的影响  31
  3.12 激活蛋白对番茄叶片过氧化物酶(POD)活性的影响  31-32
  3.13 激活蛋白对番茄叶片多酚氧化酶(PPO)活性的影响  32-33
4 结论  33-35
参考文献  35-39
致谢  39-40
作者简历  40

稻瘟菌蛋白激发子分离纯化及生物活性

内容摘要

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