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人骨髓间充质干细胞对外周血T淋巴细胞的免疫调节及抗肿瘤效应的影响

作　者: 司志刚
导　师: 白海；王存邦
学　校: 兰州大学
专　业: 内科血液病学
关键词: 骨髓间充质干细胞细胞培养流式细胞术 T淋巴细胞抗肿瘤影响免疫调节干扰素γ 白细胞介素4 K562细胞 PHA MTT
分类号: R329.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

目的建立骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells MSCs)培养、扩增与鉴定及外周血T淋巴细胞分离、纯化的方法；观察MSCs及上清对T淋巴细胞增殖及分泌IL-4、IFN-γ的影响；MSCs对T淋巴细胞增殖影响的可逆性研究；MSCs对T淋巴细胞杀伤K562细胞的影响并探讨可能机制。方法密度梯度离心法分离出单个核细胞，细胞贴壁法培养并扩增MSCs，倒置相差显微镜观察MSCs细胞形态，流式细胞术检测MSCs表面抗原、地塞米松诱导MSCs向脂肪细胞分化；尼龙棉柱法从外周血分选出T淋巴细胞，流式细胞术进行鉴定；MTT法测定MSCs对T淋巴细胞增殖的影响，ELISA法检测反应体系中IFN-γ、IL-4的分泌；MTT法测定MSCs对T淋巴细胞增殖影响的可逆性；LDH法检测T淋巴细胞对K562细胞的杀伤，ELISA法检测反应体系IFN-γ、IL-4的分泌，流式细胞术检测CD4~+、CD8~+、CD4~+D25~+T淋巴细胞的比例。结果MSCs形态均匀一致，生长曲线显示增殖能力强，流式细胞仪检测显示CD44、CD13高表达，经地塞米松诱导后MSCs向脂肪细胞分化，尼龙棉柱法分离的单个核细胞其CD3阳性细胞高表达；MSCs及上清对T淋巴细胞增殖表现为抑制效应；MSCs及上清抑制T淋巴细胞IFN-γ的分泌，MSCs促进T淋巴细胞IL-4的分泌，上清本身并不能促进IL-4分泌；MSCs对T淋巴细胞增殖抑制具有可逆性；MSCs处理的T淋巴细胞CD4~+、CD4~+CD25~+亚群升高，MSCs减弱了T淋巴细胞对K562细胞的杀伤效应，同时IFN-γ分泌减少、IL-4分泌增加。结论本实验获得性能可靠的MSCs及T淋巴细胞；MSCs及上清对T淋巴细胞增殖表现为抑制效应，其作用机制可能包括直接接触及分泌细胞因子两种途径；MSCs及上清抑制T淋巴细胞IFN-γ的分泌，MSCs却促进T淋巴细胞IL-4的分泌，MSCs可能通过改变T淋巴细胞分泌细胞因子的种类和数量影响T淋巴细胞增殖：MGCs对T淋巴细胞增殖抑制具有可逆性，MSCs可能不通过凋亡途径抑制T淋巴细胞的增殖；MSCs减弱了T淋巴细胞对K562细胞杀伤效应，与CD4~+、CD4~+CD25~+T淋巴细胞比例增加及IFN-γ、IL-4分泌水平改变相关。

全文目录

中文摘要  5-7
Abstract  7-12
前言  12-14
材料与方法  14-19
实验结果  19-30
讨论  30-36
小结  36-38
参考文献  38-41
综述 CD_4~+CD_(25)~+调节性T细胞及其在移植耐受中的作用  41-46
攻读学位期间发表论文  46-47
致谢  47

人骨髓间充质干细胞对外周血T淋巴细胞的免疫调节及抗肿瘤效应的影响

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