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硬壳蛤性腺发育和卵母细胞成熟机理初步研究

作　者: 王清
导　师: 张涛
学　校: 中国科学院研究生院（海洋研究所）
专　业: 水产养殖学
关键词: 硬壳蛤性腺发育卵母细胞成熟信号通路
分类号: S917.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

采用体外药物诱导的方法,研究了5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）诱导的硬壳蛤卵母细胞成熟过程中cAMP信号通路的作用。结果表明,5-HT （0.01—100μM）均能够显著地诱导硬壳蛤卵母细胞的成熟。磷酸二酯酶抑制剂—咖啡因、茶碱和IBMX（3-异丁基-1-甲基黄嘌呤）可以单独抑制卵母细胞的自发成熟,但效果不显著。10mM的咖啡因和茶碱以及5mM的IBMX能够显著地抑制5-HT的诱导效果。dbcAMP（双丁酰基环腺苷一磷酸）不但能够抑制卵母细胞的自发成熟,而且还可以抑制5-HT诱导的成熟。因此,cAMP信号通路参与了5-HT诱导的硬壳蛤卵母细胞的成熟过程,并且该信号通路起着负调控的作用。研究了PLC（磷脂酶C）和PKC（蛋白激酶C）的激活剂/抑制剂对5-羟色胺诱导的卵母细胞成熟的影响。高浓度的新霉素（PLC抑制剂）可以抑制5-HT诱导的卵母细胞的成熟,而DMBA（9,10-Dimethy-1,2-benzanthracene,9,10–二甲基胆蒽,PLC激活剂）则能够促进成熟。PMA（phorbol 12-myristate 13-acetate,佛波十四烷酸乙酸酯,PKC激活剂）能够抑制5-HT诱导的成熟,而Spingosine（PKC抑制剂）则可以促进卵母细胞的成熟。从而推测,5-HT诱导的卵母细胞成熟需要磷脂酰肌醇信号通路的激活。PLC浓度的降低能够抑制5-HT诱导的卵母细胞成熟;PKC浓度的降低则会促进卵母细胞的成熟。因此,在硬壳蛤卵母细胞的成熟过程中,PLC起促进的作用,DAG（二酰肌甘油）–PKC通路则起抑制的作用。细胞外高浓度Ca²⁺能够促进硬壳蛤卵母细胞的成熟,Ca²⁺离子载体A23187也可以促进硬壳蛤卵母细胞的成熟。1-100μM异搏定（Verapamil,钙离子通道阻断剂）能够抑制卵母细胞的成熟,而100μM的Verapamil能够完全抑制其成熟。上述结果表明细胞外Ca²⁺对硬壳蛤卵母细胞的成熟是必需的,而且起到促进卵母细胞成熟的作用。三氟拉嗪(TFP,Ca²⁺与CaM结合的拮抗剂)能够抑制卵母细胞的成熟,高浓度的三氟拉嗪（1mM）能够完全抑制卵母细胞的成熟。说明CaM起到促进卵母细胞成熟的作用。可见,Ca²⁺通过与CaM的相互作用,共同起到促进硬壳蛤卵母细胞成熟的作用。5-HT诱导成熟的卵母细胞可以完成受精过程,其受精过程以及幼虫发育情况与正常受精发育过程类似,没有显著差异。高浓度的新霉素可以抑制受精过程,而茶碱和咖啡因对受精没有影响。从而推测,磷脂酰肌醇信号通路参与了硬壳蛤卵母细胞的受精过程,而cAMP信号通路可能没有参与受精过程。发现硬壳蛤的性腺发育与我国常见的双壳类如泥蚶相似。硬壳蛤卵母细胞中卵黄粒主要由线粒体、高尔基液泡、内质网和微吞饮泡形成。

全文目录

前言  4-8
中文摘要  8-10
英文摘要  10-12
第一章双壳贝类繁殖生物学的研究进展  12-26
  第一节双壳贝类性腺发育和配子超微结构的研究进展  12-17
  第二节双壳贝类卵母细胞成熟过程中的信号通路研究进展  17-24
  第三节双壳贝类人工授精以及受精过程中的信号通路研究进展  24-26
第二章硬壳蛤性腺发育及配子超微结构  26-32
  1 前言  26
  2.材料和方法  26-27
    2.1 亲贝培养  26-27
    2.2 组织学切片  27
    2.3 扫描电镜和透射电镜  27
  3 结果  27-30
  4 讨论  30-31
  5 小结  31-32
第三章cAMP 信号通路与硬壳蛤卵母细胞的成熟  32-47
  1 前言  32-33
  2 材料与方法  33-34
    2.1 亲贝  33
    2.2 试剂及母液配制  33
    2.3 卵母细胞的获得  33
    2.4 卵母细胞的人工诱导成熟及GVBD 发生率的计算  33-34
    2.5 细胞内cAMP 浓度的测定  34
    2.6 数据统计  34
  3 结果  34-42
  4 讨论  42-46
  5 小结  46-47
第四章磷脂酰肌醇信号通路与硬壳蛤卵母细胞的成熟  47-59
  1 前言  47
  2.材料和方法  47-49
    2.1 亲贝  47-48
    2.2 试剂及母液配制  48
    2.3 卵母细胞的获得  48
    2.4 卵母细胞的人工诱导成熟及GVBD 发生率的计算  48-49
    2.5 数据统计  49
  3 结果  49-55
  4 讨论  55-58
  5 小结  58-59
第五章硬壳蛤的人工授精以及受精过程中的信号通路  59-68
  1 前言  59
  2 材料与方法  59-60
    2.1 卵母细胞的获得及诱导  59-60
    2.2 各种药物对受精过程的影响  60
    2.3 人工授精  60
    2.4 幼虫培养  60
    2.5 相关指标  60
  3 结果  60-64
  4 讨论  64-66
  5 小结  66-68
第六章总结  68-69
参考文献  69-80
硕士期间发表和撰写的文章  80-81
致谢  81-82
图版  82-86

硬壳蛤性腺发育和卵母细胞成熟机理初步研究

内容摘要

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