学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

柚苷酶生产菌株的选育及其酶学性质的研究

作　者: 文蓉
导　师: 黎继烈
学　校: 中南林业科技大学
专　业: 发酵工程
关键词: 柚苷酶青霉紫外诱变亚硝基胍诱变复合诱变 N~+离子注入酶学性质
分类号: TQ925
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 44次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

柚皮苷是柑橘类果汁中的主要苦味成分,会明显的降低柑橘类果汁的品质。酶法脱苦与传统方法相比具有工艺简单、反应条件温和、对果汁品质无影响及环保无污染等优势因而是最理想的脱苦方法。本文采用透明圈法从沙田柚皮腐烂液中筛选出一株产柚营酶的野生菌株,随后采用紫外、亚硝基胍、亚硝基胍和紫外结合以及离子注入等方式对该菌株进行诱变选育,并对选育菌株所产柚苷酶的酶学性质进行了研究。主要研究结果如下：(1)出发菌株的筛选采用透明圈法从发霉的柚子皮上筛选到产柚苷酶能力强的菌株52株,经摇瓶复筛后得到菌株M1,其发酵液酶活为140.8 U/mL,经传代验证该菌株具有较好的遗传稳定性。对菌株M1进行传统形态学分类学鉴定,初步鉴定为青霉,命名为青霉M1(Penicillium sp.M 1)。(2)青霉M1(Penicillium sp.M 1)的紫外、亚硝基胍及紫外和亚硝基胍复合诱变UV诱变条件为15W紫外灯,照射处理时间5 min,获得一株高产柚苷酶菌株青霉U15(Penicillium sp.U 15),摇瓶发酵酶活为334.3 U/mL,其产酶能力较出发菌株提高了137.4%。NTG诱变条件为NTG浓度800μg/mL,时间2h,获得一株高产柚苷酶菌株青霉N09(Penicillium sp.N 09),摇瓶发酵酶活为380.5U/mL,其产酶能力较出发菌株提高了14.4%。紫外和亚硝基胍诱变条件为NTG浓度800μg/mL,UV照射时间为4 min,获得一株高产柚苷酶菌株青霉UN02(Penicillium sp.UN 02),摇瓶发酵酶活为448.9 U/mL其产酶能力较出发菌株提高了18.0%,经传代验证,该菌株具有较理想的遗传稳定性,而且具有比较理想的产酶潜力,有待进一步开发。(3)N+离子注入法诱变用N+离子注入法对高产菌株青霉UN 02(Penicillium sp.UN 02)进行进一步的诱变选育,采用注入能量为15 KeV,剂量为192×1013 ions/cm2范围附近诱变,经过透明圈初筛和摇瓶复筛得到青霉1523(Penicillium sp.1523),摇瓶发酵酶活为573.6 U/mL,其产酶活力出发菌株提高了27.8%,且该菌株具有较好的遗传稳定性,是一株比较理想的柚苷酶高产菌株。(4)柚苷酶酶学性质的研究通过对青霉1523(Penicillium sp.1523)所产柚苷酶的酶学性质试验,得出最适反应温度为50℃,最适pH为4.0；多种金属阳离子对该酶活性有不同的影响,Ca2+、Mg2+在浓度为2.5～100 mM时,对柚苷酶酶活有促进作用；Mn2+、Zn2+、EDTA在浓度为2.5-30 mM时,对柚苷酶酶活有促进作用；Cu2+在浓度为2.5-50 mM时对柚苷酶酶活有促进作用；Fe2+、SDS在浓度较低时对柚苷酶酶活有抑制作用。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-11
1 绪言  11-25
  1.1 柚苷酶的生产及应用  11-14
    1.1.1 柚苷酶法脱苦机理  11-12
    1.1.2 柚苷酶生产菌株的选育及发酵  12-13
    1.1.3 柚苷酶的应用  13-14
  1.2 类柠檬苦素脱苦酶的生产及应用  14-16
    1.2.1 类柠檬苦素酶法脱苦机理  14-15
    1.2.2 类柠檬苦素脱苦酶的分离和菌种的选育  15
    1.2.3 类柠檬苦素脱苦酶的应用  15-16
  1.3 国内外诱变及育种现状  16-23
    1.3.1 物理诱变剂  16-19
    1.3.2 化学诱变剂  19-21
    1.3.3 生物诱变剂  21-22
    1.3.4 复合因子诱变  22-23
  1.4 本论文的研究意义和内容  23-25
    1.4.1 本论文的研究意义  23
    1.4.2 本论文研究内容  23-25
2 柚苷酶生产菌株的筛选及鉴定  25-32
  2.1 材料与方法  25-28
    2.1.1 主要试剂  25
    2.1.2 主要试验仪器  25
    2.1.3 主要培养基  25-26
    2.1.4 柚苷酶酶活的测定  26-27
    2.1.5 柚苷酶生产菌株的初筛  27
    2.1.6 柚苷酶生产菌株的复筛  27
    2.1.7 菌株的遗传稳定性测定  27
    2.1.8 菌种的传统形态学分类鉴定  27-28
  2.2 结果与分析  28-31
    2.2.1 柚苷酶生产菌株的初筛  28
    2.2.3 柚苷酶生产菌株的复筛  28-29
    2.2.3 菌株M1的遗传稳定性  29-30
    2.2.4 菌种的传统形态学分类鉴定  30-31
  2.3 小结  31-32
3 紫外、亚硝基胍及复合诱变选育柚苷酶高产菌株  32-45
  3.1 材料与方法  32-35
    3.1.1 出发菌种的来源  32
    3.1.2 主要试剂  32
    3.1.3 主要仪器  32
    3.1.4 主要培养基  32-33
    3.1.5 试验方法  33-35
  3.2 结果与分析  35-43
    3.2.1 紫外诱变条件的选择  35
    3.2.2 亚硝基胍诱变条件的选择  35-37
    3.2.3 紫外和亚硝基胍复合诱变条件的选择  37-38
    3.2.4 紫外诱变初筛及复筛  38-41
    3.2.5 亚硝基胍诱变初筛及复筛  41-42
    3.2.6 紫外和亚硝基胍复合诱变初筛及复筛  42-43
  3.3 小结  43-45
4 氮离子注入柚苷酶生产菌的诱变选育  45-51
  4.1 材料与方法  45-47
    4.1.1 材料与试剂  45
    4.1.2 主要试验仪器  45
    4.1.3 主要培养基  45-46
    4.1.4 培养方法  46
    4.1.5 氮离子注入诱变  46
    4.1.6 筛选方法  46-47
    4.1.7 突变株的遗传稳定性  47
    4.1.8 柚苷酶酶活的测定  47
  4.2 结果与分析  47-50
    4.2.1 氮离子注入诱变条件的选择  47-49
    4.2.2 氮离子注入诱变的初筛和复筛  49
    4.2.3 突变株1523的遗传稳定性  49-50
  4.3 小结  50-51
5 柚苷酶酶学性质的研究  51-56
  5.1 材料与方法  51-52
    5.1.1 主要试剂  51
    5.1.2 主要试验仪器  51
    5.1.3 柚苷酶酶液的制备  51-52
    5.1.4 柚苷酶的最适温度及热稳定性的测定  52
    5.1.5 柚苷酶的最适pH的测定  52
    5.1.6 金属离子及其它化学物质对柚苷酶酶活性的影响  52
    5.1.7 柚苷酶酶活的测定  52
  5.2 结果与分析  52-55
    5.2.1 温度对柚苷酶酶活性及稳定性的影响  52-53
    5.2.2 pH对柚苷酶酶活性的影响  53-54
    5.2.3 金属离子及其它化学物质对柚苷酶酶活性的影响  54-55
  5.3 小结  55-56
6 结论  56-58
展望  58-59
参考文献  59-66
附录  66-67
致谢  67

柚苷酶生产菌株的选育及其酶学性质的研究

内容摘要

全文目录

相似论文