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γ-分泌酶抑制剂DAPT对神经干细胞增殖分化影响及可能机制

作　者: 蔡良知
导　师: 郑志竑
学　校: 福建医科大学
专　业: 生物化学和分子生物学
关键词: 神经干细胞 增殖 分化 DAPT 蛋白质组
分类号: Q42
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要


目的采用体外培养的大鼠脑神经干细胞(neural stem cell, NSCs),了解γ-分泌酶抑制剂DAPT对神经干细胞分化和增殖能力的影响,检测Notch通路的信号分子基因表达的情况以及明确与Notch信号调控相关的蛋白质分子及其他与NSCs生物学特性相关的蛋白质,探讨DAPT调控神经干细胞增殖和生长的可能机制。方法1.采用无血清神经球培养法,从出生2~3d的大鼠脑皮质分离培养NSCs,用免疫荧光细胞染色方法对培养4周的NSCs进行自我更新能力﹑特异性标志和多向分化能力等方面的鉴定,并将证实为NSCs的细胞用于本研究的实验。2.经200nmol/L的DAPT处理后的NSCs,用RT-PCR法检测Notch通路信号分子(包括RBP-JK, HES 1)的表达情况。3.用CCK-8法和细胞计数法检测在200nmol/L DAPT作用下NSCs的增殖速率。4. 200nmol/L的DAPT处理后的NSCs经1%胎牛血清诱导72h后,用免疫荧光染色结合细胞计数的方法,观察其分化为神经元、神经胶质细胞和少突胶质细胞的比例。5. 200nmol/L的DAPT处理后的NSCs经1%胎牛血清诱导72h后,提取细胞总蛋白,用双向电泳法分离蛋白,并选取与对照组表达显著差异的蛋白质点进行质谱分析,明确与Notch信号调控相关的蛋白质分子及其他与NSCs生物学特性相关的蛋白质。

全文目录


英文缩写字表  3-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-10
引言  10-12
第一部分 新生大鼠神经干细胞的体外培养和鉴定  12-24
  材料与方法  12-16
  结果  16-21
  讨论  21-23
  小结  23-24
第二部分 DAPT对神经干细胞的增殖和分化的影响  24-41
  材料与方法  24-29
  结果  29-37
  讨论  37-39
  小结  39-41
第三部分 DAPT对神经干细胞蛋白表达谱的影响  41-53
  材料与方法  41-46
  结果  46-48
  讨论  48-52
  小结  52-53
结论  53-54
参考文献  54-56
综述  56-63
致 谢  63

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中图分类: > 生物科学 > 生理学 > 神经生理学
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