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贝类嗅觉基因的鉴定与同源性研究

作　者: 郑伟
导　师: 吴岷；李继刚
学　校: 河北大学
专　业: 动物学
关键词: 嗅觉嗅质受体假基因化软体动物 SMART技术 cDNA文库
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

嗅觉是动物对挥发性物质的感受过程。嗅质分子、嗅质结合蛋白以及嗅质受体是完成嗅觉感受最初阶段的三个要素。嗅质分子一般为小分子挥发性物质,需要先与嗅质结合蛋白结合以助溶,再与受体结合,通过与其他视觉等类似的过程在嗅觉神经元中引起电信号。该电信号传至中枢神经系统,产生嗅觉。嗅质受体编码基因数目庞大,其假基因化程度与物种生存对嗅觉的依赖程度存在一定关系。本实验以实验室培养的贝类模式动物Helix aspersa成体为研究材料,应用SMART cDNA Library Construction技术,通过提取总RNA,反转录合成cDNA, LD-PCR扩增cDNA,筛选,插入片段至载体λTriplEx2,再经体外包装,构建了该模式动物的cDNA文库,经平板培养及蓝白斑筛选检测,未扩增文库滴度达到1.22×106pfu/mL,扩增文库滴度达到5.6×109pfu/mL,重组率达到96.43%以上,通过cDNA文库,克隆,分离并测序了与嗅质受体相关的基因,再与其他已知嗅质受体一起构建系统发育树,推测其嗅觉基因在整个嗅觉基因演化过程中的进化方向与进化距离。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-9
第1章绪论  9-19
  1.1 嗅觉基因的研究背景  9-17
    1.1.1 气味分子  10
    1.1.2 嗅质结合蛋白  10-11
    1.1.3 嗅质受体的编码基因及蛋白质结构  11-13
    1.1.4 嗅质受体的进化  13-16
    1.1.5 G蛋白  16
    1.1.6 神经中枢的嗅觉过程  16-17
  1.2 贝类嗅觉基因的研究背景  17-19
第2章实验设备与试剂  19-20
  2.1 设备  19
  2.2 试剂  19-20
第3章研究方案  20-30
  3.1 材料  20
  3.2 cDNA文库构建方法  20-27
    3.2.1 总RNA的提取  20
    3.2.2 第一链cDNA的合成  20-21
    3.2.3 第二链cDNA的合成  21-22
    3.2.4 cDNA包装前的处理  22-23
    3.2.5 cDNA片段的分级分离  23-24
    3.2.6 cDNA与λTriplEx2载体连接及体外包装  24
    3.2.7 细菌培养  24-25
    3.2.8 文库质量的鉴定  25-26
    3.2.9 文库扩增及鉴定  26-27
    3.2.10 cDNA文库的保存  27
  3.3 将λTriplEx2转为pTriplEx2  27
  3.4 提取质粒DNA  27-28
  3.5 双酶切质粒DNA并测序  28-30
第4章结果与分析  30-37
  4.1 总RNA的质量  30
  4.2 反转录及LD-PCR扩增  30-32
  4.3 酶切及过柱层析  32
  4.4 未扩增文库质量鉴定  32-33
  4.5 扩增文库质量分析  33
  4.6 序列进行BLAST比对  33-34
  4.7 系统发育树的构建与验证  34-37
第5章讨论  37-39
  5.1 总RNA的提取  37
  5.2 SMART技术构建cDNA文库  37
  5.3 BLAST比对结果分析  37-39
第6章结论  39-40
参考文献  40-43
研究成果  43-44
致谢  44

贝类嗅觉基因的鉴定与同源性研究

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