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杜氏盐藻（Dunaliella salina）cDNA文库构建及表达序列标签分析

作　者: 张翅
导　师: 红凌
学　校: 华中科技大学
专　业: 微生物学
关键词: 杜氏盐藻 cDNA文库表达序列标签
分类号: Q943.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 37次
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内容摘要

杜氏盐藻(Dunaliella salina),属于绿藻门,绿藻纲,团藻目。是一种单细胞绿藻,无细胞壁,能在0.5～5.5 mol/L NaCl的盐浓度中生存。被认为是唯一能在高盐浓度范围生长,并能进行光合自养的真核生物。由于是最耐盐的真核生物,且拥有简单的细胞结构,因此成为研究耐盐机制和寻找耐盐基因的理想模式生物。近年来,杜氏盐藻也成为固定大气中CO2,减少温室效应,并产生生物能源的研究热点。然而,杜氏盐藻的基因组信息尚未测序完成,关于杜氏盐藻的基因信息非常少,在美国国立生物技术信息中心(NCBI)网站上,杜氏盐藻的核苷酸序列只有213条,表达序列标签(EST, Expressed Sequence Tag)仅有3936条。而这些有限的基因信息,对于进一步研究杜氏盐藻是远远不够的。因此,构建一个高质量的杜氏盐藻的cDNA文库,为快速、方便的筛选和分析杜氏盐藻中的有价值的基因提供了平台,为构建遗传图谱和比较基因组学提供了依据。我们在室内成功养殖杜氏盐藻(Dunaliella salina)的基础上,绘制了杜氏盐藻在1.5 mol/L NaCl盐浓度下的生长曲线。使用宝生物cDNA文库构建试剂盒,构建在1.5 mol/L NaCl盐胁迫下的杜氏盐藻的cDNA文库。取处于生长对数期的杜氏盐藻,提取总RNA和mRNA后,利用反转录酶M-MLV合成cDNA第一条链,再将RNA链置换成DNA链,合成cDNA第二条链,加上EcoR I接头,Not I酶切后,经过Spin Column除去短链cDNA,与载体pAP3neo进行连接,转化大肠杆菌DH10B。经鉴定,原始文库的滴度达1.2×10~6cfu/mL,重组率高达95%,且多数插入片段均在500bp以上。随机挑取70个单克隆进行序列测定,得到66条非冗余序列。所测序列经过生物信息学方法分析后,除13个ESTs(Expressed Sequence Tags,表达序列标签)与NCBI Genbank中的已知盐藻EST高度同源外,其它EST均为新的未见报道过的表达序列标签,这些新的ESTs数据,很有可能编码杜氏盐藻中的独特基因,为进一步筛选和克隆杜氏盐藻耐盐性基因提供了筛选平台,为盐藻基因组以及EST数据库增补了大量信息。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-7
1 绪论  7-16
  1.1 杜氏盐藻（Dunaliella salina）的分子生物学研究进展  7-14
  1.2 本课题选题背景与研究意义  14-16
2 杜氏盐藻mRNA 的提取  16-27
  2.1 材料与方法  16-23
  2.2 结果与分析  23-27
3 杜氏盐藻cDNA 文库的构建和分析  27-38
  3.1 材料与方法  27-37
  3.2 结果与分析  37-38
4 表达序列标签的分析  38-47
  4.1 分析方法  38-39
  4.2 分析结果  39-47
5 讨论与展望  47-49
致谢  49-50
参考文献  50-55
附录1 硕士研究生期间发表论文  55-56
附录2 英文缩写词表  56

杜氏盐藻（Dunaliella salina）cDNA文库构建及表达序列标签分析

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