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鸭早期胚胎发育相关基因消减文库的构建与分析

作　者: 钟灵秀
导　师: 卢立志；石放雄
学　校: 南京农业大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 鸭早期胚胎发育 DSN 消减杂交 cDNA文库
分类号: S834
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

本实验以浙江省优质蛋鸭品种缙云麻鸭的鸭胚为实验材料,以DSN酶介导的均一化消减杂交为实验手段,来构建鸭早期胚胎发育相关基因消减文库,以期找到与鸭胚胎发育相关的新基因,探索胚胎发育基因表达调控的分子机制。本实验共构建了两个鸭早期胚胎发育相关基因的消减杂交文库。第一个文库以上一枚蛋产出后的第6小时和第20小时鸭输卵管中的蛋为实验材料(其中6小时作为驱动组,20小时作为实验组)进行DSN介导的消减杂交,最终得到的消减产物与pUCm-T载体进行连接,通过蓝白斑筛选,随机挑选其中的216个阳性克隆,最后通过菌液PCR挑选大于750bp的片段进行测序。测序结果在Vecscreen上去除载体序列,用Staden Package去除冗余序列,最终共得到了54条独立的差异表达基因,经BLAST比对,其中有44条基因具有同源基因,另外10条无同源基因。通过GO注释发现,这些基因在代谢、建立细胞定位、生物调节等各种生物途径中都发挥着作用,而一些基因可参与两种或两种以上的生物途径。进一步查阅资料对相关的同源基因进行研究,其中一些基因在神经系统发育、免疫调节、转录调控等方面发挥着作用,另一些则尚未有相关功能的研究报道。第二个文库则分别以上一枚蛋产出后的6小时以及25小时(即鸭胚发育的第10期)作为实验材料(其中6小时仍作为驱动组,25小时作为实验组),采用同样的文库构建方法,最终共获得了66条差异表达基因,比对后发现其中48条具有同源基因,另外18条无同源基因。在这66条基因中,有27条与第一文库筛选出来的基因相同,其中有同源基因的共有23条相同,未知基因有4条相同,表明这些基因在胚胎早期发育过程中发挥着持续的作用。而本文库中仍有25条基因可能在此阶段特异表达,其中一些基因仍与神经发育、免疫调节等方面相关。两个文库中均发现了未知的新基因,这些未知基因以及上面提及本身功能尚未被探究的基因,都可以通过RNA干扰等技术进一步去探索,进而对家禽早期胚胎发育过程有更深入的了解。

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摘要 6-7ABSTRACT 7-9缩略词表 9-10第一部分文献综述 10-26 第一章家禽早期胚胎发育 10-16 1 家禽输卵管结构及蛋的形成 10-13 2 家禽产蛋的节律 13 3 采样方法 13 4 鸭早期胚胎发育 13-14 5 小结 14-15 参考文献 15-16 第二章差异表达基因分离技术及在家禽研究中的应用 16-26 1 差异表达基因分离技术 16-19 2 差异表达分离技术在家禽中的应用 19-21 3 结语 21-23 参考文献 23-26第二部分实验研究 26-56 第三章鸭早期胚胎发育相关基因的筛选 26-44 1 材料与方法 26-31 2 结果与分析 31-39 3 讨论 39-42 参考文献 42-44 第四章鸭胚发育第10期消减文库的构建与分析 44-56 1 材料与方法 44 2 结果与分析 44-53 3 讨论 53-55 参考文献 55-56总结 56-58致谢 58

鸭早期胚胎发育相关基因消减文库的构建与分析

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