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RNAi技术构建NF1肿瘤细胞模型的实验研究

作　者: 李伟峰
导　师: 周列民
学　校: 中山大学
专　业: 神经病学
关键词: 型神经纤维瘤病 神经纤维瘤 雪旺细胞 RNAi NF1 mTERT
分类号: R739.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要


1.研究背景I型神经纤维瘤病(neurofibromatosis type 1, NF1)是源于神经嵴细胞分化异常而导致的多系统损害的常染色体显性遗传病。多发性皮肤和皮下神经纤维瘤是NF1的主要临床特征之一,它主要是由雪旺细胞和成纤维细胞组成的良性异质性肿瘤,近来的研究倾向于认为雪旺细胞为其起源细胞,我们课题组前期的实验也证实了这一点。NF1基因是一个大的基因,编码的蛋白质称为神经纤维素,该蛋白含有与酵母IRA蛋白和哺乳动物的Ras-GTP酶激活蛋白相同的功能区,Ras-GTP酶激活蛋白主要作用是通过促使Ras从活性的GTP形式转化为非活性的GDP形式来抑制Ras的活性。根据国内外对NF1的研究,目前认为NF1患者神经纤维瘤的发病机制主要与NF1基因突变导致雪旺细胞rasGTP水平增高有关,但其确切的机制仍不是很清楚。RNAi技术是通过双链RNA介导的特异性降解靶mRNA导致转录后基因表达水平下降的一种方法,是近年发展起来的特异性抑制基因表达的重要手段,被广泛用于基因功能的研究。最近,发卡样siRNA表达载体的应用为RNA干扰技术的推广应用开辟了广阔的前景,其方法是通过合成靶基因的特异性发卡样短链寡核苷酸序列,定向亚克隆入真核表达载体,再转染细胞后,通过胞内自身的RNA聚合酶Ⅲ的作用,自动释放出双链siRNA干预特异性靶基因mRNA的翻译。该方法简便易行,构建的载体也易保存和大量扩增,因此倍受关注。现已证明: siRNA干扰技术是目前研究基因功能最有效的方法,在体内外实验中得到广泛证实。2.研究目的本研究旨在采用RNAi技术,通过构建NF1基因特异性siRNA质粒表达载体,特异性的抑制小鼠离体雪旺细胞中NF1基因的表达,并观察其介导的雪旺细胞生

全文目录


中文摘要  3-6
英文摘要  6-11
前言  11-20
第一部分 NF15iRNA 质粒载体的构建与鉴定  20-27
  1 材料和方法  20-23
  2 结果  23-24
  3 讨论  24-26
  4 结论  26-27
第二部分 特异性siRNA质粒载体对NIH3T3 细胞株中NF1 基因表达的抑制以及质粒筛选  27-40
  1 材料和方法  27-35
  2 结果  35-37
  3 讨论  37-39
  4 结论  39-40
第三部分 RNAi技术构建小鼠NF1肿瘤细胞模型的实验研究  40-54
  1 材料和方法  40-44
  2 结果  44-49
  3 讨论  49-53
  4 结论  53-54
参考文献  54-62
附录  62-64
英文缩写词表  64-65
发表文章及获得奖励  65-66
致谢  66-67
原创性声明  67

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 神经系肿瘤
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