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仔猪早期性腺StAR mRNA表达规律研究

作　者: 詹晓庆
导　师: 张家骅
学　校: 西南大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 类固醇合成快速调节蛋白mRNA 仔猪睾丸卵巢组织原位杂交
分类号: S828
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

提高动物繁殖力一直是生殖生物学研究的目标，也是畜牧业中必须解决的关键性问题，类固醇激素合成能力的强弱是影响繁殖力的一个重要因素。近半个世纪以来，类固醇激素生物合成的调节机制一直是内分泌研究的热点。以往通过体内或体外研究方法，比较详细地研究了促性腺激素对类固醇合成的慢反应调节，为深入理解类固醇合成的调节机制奠定了基础。近年来的研究表明，类固醇合成的快速调节机制对于调节动物的生殖活动有着十分重要的意义，目前这一领域的研究多集中在实验动物，对于家畜则很少见报道。猪作为我国最有优势的畜群种类，在世界畜牧产业的发展中具有举足轻重的作用。为了充分发挥我国猪种特有的繁殖优势，本研究以仔猪为实验材料，对与类固醇激素合成有关的StAR基因进行了研究。类固醇合成快速调节蛋白(steroidogenic acute regulatory protein，StAR)是类固醇激素合成的关键性调节因子，主要调节胆固醇从线粒体外膜转运到线粒体内膜。StAR蛋白主要在类固醇合成组织中表达，人StAR基因发生突变可引起先天性脂样肾功能增生综合症(CLAH)，人和动物StAR蛋白水平受杀虫剂影响而降低，不仅可引起睾酮分泌量降低。还会造成阴茎勃起障碍，导致雄性不育。以往对StAR蛋白和StARmRNA的研究主要集中在动物的胚胎期和成年阶段，而对发育早期阶段的研究很少，王鲜忠等用免疫组化法和放射免疫法研究了StAR蛋白在仔猪睾丸中的表达规律，但对于StAR mRNA在仔猪性腺发育早期表达还未有人报道。本研究以重庆本地长白仔猪作实验动物，从仔猪睾丸组织中提取RNA，做反转录PCR，获得目的cDNA后进行测序和序列分析，再对StARcDNA进行地高辛标记，获得所需探针；同时，无菌条件下采集7、14、23、28、37日龄的仔猪睾丸和卵巢，处理后放入RNALOCKER液中保存，用4％多聚甲醛进行固定，做冰冻切片；最后进行组织原位杂交，检测仔猪睾丸和卵巢中StAR mRNA的表达水平。结果表明：(1)在7日龄，14日龄，23日龄和37日龄的仔猪睾丸中，StARmRNA主要在睾丸的间质细胞中表达，7日龄几乎没有表达，14日龄，23日龄和37日龄的表达水平较高；(2)在14日龄，23日龄，28日龄和37日龄的仔猪卵巢中，StARmRNA主要在卵巢的初级卵泡的颗粒细胞中表达，7日龄仔猪卵巢上只有原始卵泡，无初级卵泡，StARmRNA在其中无表达信号，14日龄仔猪卵巢与7日龄的仔猪卵巢形态上无明显变化，仍存

全文目录

第1章 StAR蛋白研究进展  10-21
  1 StAR蛋白的结构  10-11
  2 StAR蛋白的作用机制  11-12
  3 StARmRNA和StAR蛋白表达的定位  12-13
  4 stAR的表达调控  13-17
    4.1 激素的调控  13-14
    4.2 自我调控  14
    4.3 转录因子的调控  14-17
      4.3.1 正相调节转录因子  14-16
      4.3.2 负相调节转录因子  16-17
    4.4 蛋白翻译后修饰  17
  5 StAR基因表达信号通路  17-19
    5.1 钙离子(Ca~(2+)信号传导系统  17-18
    5.2 花生四烯酸代谢途径  18
    5.3 氯离子通道  18
    5.4 MAPK/ERKs级联途径  18-19
  6 StAR基因与CLAH的关系  19-21
第2章引言  21-23
  1 研究的背景和意义  21-22
  2 研究内容及技术路线  22-23
第3章 stAR基因克隆、序列分析以及探针的制备  23-33
  1 材料  23-24
  2 方法  24-27
  3 结果  27-31
  4 讨论  31-32
  5 小结  32-33
第4章冰冻切片的制备及组织原位杂交  33-48
  1 材料  33-34
  2 方法  34-36
  3 结果  36-43
  4 讨论  43-48
第5章结论  48-49
参考文献  49-56
在读期间参加的课题和发表的论文  56-57
致谢  57

仔猪早期性腺StAR mRNA表达规律研究

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