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睾丸内注射和体内电穿孔法建立转基因小鼠的实验研究

作　者: 袁进
导　师: 安靓
学　校: 第一军医大学
专　业: 医学发育生物学
关键词: 辜丸内注射 体内电穿孔 转基因小鼠 SPF级KM雄鼠 生殖细胞
分类号: R-332
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
下　载: 162次
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内容摘要


转基因动物在医学、生命科学、生物制药等领域有着广泛的研究和应用前景,因此科学家们一直在探索一种更简便易行、经济实用而又高效的转基因方法。近几年来,随着科学技术的发展,体内基因转移已成为用于基因治疗、生物学分析等领域非常受欢迎的一种技术,体内电穿孔技术就是其中之一。 精原干细胞是精子的前体细胞,是雄性动物中唯一可以自我增殖、更新并向下一代传递遗传信息的细胞类型。对精原干细胞的操作和修饰在建立转基因动物模型、制备乳腺生物反应器等方面有重要意义。为了探讨将外源基因注射到在体睾丸生精小管内并进行体内电穿孔以建立转基因动物的可行性,我们首先设计了低压（30～110V/cm）和高压（500～900V/cm）两组不同的体内电穿孔参数对SPF级KM雄鼠睾丸进行在体电穿孔,以观察不同的电穿孔条件对SPF级KM雄鼠睾丸损伤程度和生殖能力的影响,从而筛选出合适的体内电穿孔参数。并在此基础上,我们对插入有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因的真核表达质粒pCE-29DNA进行2种不同的处理:（1） pCE-29DNA+转染试剂(in vivo jetPITM+台盼蓝（TB）;（2） pCE-29DNA+台盼蓝（TB）。然后将这两种不同

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中图分类: > 医药、卫生 > 医学研究方法 > 实验医学、医学实验 > 医用实验动物学
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