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TLR4/MyD88信号转导通路在哮喘小鼠气道黏液高分泌中的作用

作　者: 王蕾
导　师: 张建勇
学　校: 遵义医学院
专　业: 呼吸内科
关键词: 哮喘小鼠黏蛋白 Muc5ac 卵清白蛋白脂多糖黏蛋白5ac(Muc5ac) Toll样受体4 多粘菌素B SB203580 白藜芦醇
分类号: R562.25
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的观察脂多糖(Lipopolysaccharrides, LPS)干预对哮喘小鼠气道炎症和气道黏液分泌的影响。方法清洁级BALB/c小鼠30只随机分为三组：哮喘组(AS组)10只、脂多糖干预组(LA组)10只和正常组(NS组)10只。AS组用卵清白蛋白(ovalbumin, OVA)致敏和激发制作模型,LA组于末两次激发前1h予以脂多糖雾化吸入,NS组用生理盐水致敏和激发。各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)作细胞总数和白细胞分类计数,ELISA法检测BALF中的IL-4和TNF-a水平,阿尔辛蓝—过碘酸雪夫(AB-PAS)染色观察气道杯状细胞及气道黏液分泌,HE染色观察气道及肺部病理学的改变,分别采用荧光定量PCR、免疫组织化学(IHC)和免疫印迹法(Western blot)检测肺组织中黏蛋白5ac(Muc5ac) mRNA及蛋白水平的表达。结果AS组和LA组小鼠BALF中的细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞及单核细胞百分比、IL-4和TNF-α水平、肺组织AB-PAS阳染面积、Muc5ac mRNA和蛋白表达高于NS组小鼠(P<0.01)；LA组小鼠BALF中的细胞总数、嗜酸性粒细胞(EOS)、淋巴细胞、单核细胞百分比,IL-4和TNF-α水平、肺组织AB-PAS阳染面积、Muc5acmRNA和蛋白表达高于AS组小鼠(P<0.05)。结论LPS可加重哮喘小鼠气道慢性变应性炎症和气道黏液高分泌；以5%OVA雾化吸入进行激发可制备较为理想的表现为气道慢性炎症与气道黏液高分泌的小鼠哮喘模型。目的观察多粘菌素B(PMB)、SB203580及白藜芦醇(RES)干预对哮喘组小鼠肺组织Toll样受体4(TLR4)、IL-5和气道Muc5ac mRNA及蛋白表达的影响,探讨TLR4/MyD88信号转导通路在哮喘小鼠气道Muc5ac表达中的作用及机制。方法清洁级BALB/c雄性小鼠80只,随机分成正常对照组(NS组)、哮喘组(AS组)、LPS干预组(LA组)、地塞米松干预组(DEX组)、PMB干预组(PMB组)、SB203580干预组(SB组)、RES干预组(RES组)及二甲基亚砜(DMSO)组(DMSO组),各10只。测定BALF中细胞总数和白细胞分类计数,采用ELISA检测BALF中的IL-4和TNF-α水平,AB-PAS观察气道杯状细胞增生及气道黏液物质改变,HE染色观察气道及肺组织病理学改变,荧光定量PCR检测Muc5ac mRNA、TLR4 mRNA、IL-5 mRNA在肺组织内的表达,免疫组化(IHC)与免疫印迹法(Western blot)检测肺组织Muc5ac及TLR4蛋白表达的变化。结果LA组BALF细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞计数、IL-4及TNF-a水平、AB-PAS阳染面积、Muc5ac mRNA及TLR4 mRNA水平、Muc5ac及TLR4 IOD较DEX组、PMB组、SB组、RES组增高,差异有统计学意义(P<0.01),与DMSO组比较,差异无统计学意义(P>0.05)；DEX组、PMB组、SB组和RES组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论TLR4/MyD88信号转导通路参与LPS干预的哮喘气道慢性炎症,可导致气道黏蛋白Muc5ac mRNA和蛋白的高分泌；以多粘菌素B、SB203580及白藜芦醇阻断或抑制TLR4/MyD88信号转导通路不同环节可减轻哮喘小鼠气道炎症与气道黏液高分泌。

TLR4/MyD88信号转导通路在哮喘小鼠气道黏液高分泌中的作用

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