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Iodogen法¹²⁵I标记CD28单克隆抗体2F5的实验研究

作　者: 苏娟
导　师: 苏成海
学　校: 苏州大学
专　业: 影像医学与核医学
关键词: Iodogen法 (125)~Ⅰ-2F5 单克隆抗体放射免疫显像
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:研究（125）^Ⅰ标记CD28单克隆抗体2F5的方法及标记物（125）^Ⅰ-2F5的生物学活性及体外稳定性,探讨（125）^Ⅰ-2F5对特定肿瘤放射性免疫显像的可行性。方法:1.采用Iodogen法（125）^Ⅰ标记单抗2F5,测定（125）^Ⅰ-2F5的标记率;纸层析法测定（125）^Ⅰ-2F5的放射化学纯度;将（125）^Ⅰ-2F5与不同细胞数的小鼠淋巴瘤细胞转人CD28基因细胞株CD28-T细胞悬液置于37℃细胞培养箱中反应,测定标记物的免疫活性;将标记物按1∶20的比例分别加入到生理盐水和新鲜人血清中,另取标记物不稀释作为对照,分别置于37℃、4℃条件下,观察放置0h、2h、4h、24h、48h后标记物的放化纯度,以了解其稳定性。2.自正常裸鼠尾静脉注射1.11-1.67 MBq/100μL （30-45μCi/100μL）（125）^Ⅰ-2F5后,不同时间点断颈处死小鼠,同时取血液及各主要组织器官标本,计算各组织器官不同时间点的每克组织百分注射剂量率（%ID/g）;同样方法,计算荷淋巴瘤裸鼠模型血液、肿瘤及各组织器官16h、24h、48h的每克组织百分注射剂量率（%ID/g）和肿瘤/非肿瘤（T/NT）比值。3.选用4～6周龄雌性BALB/c裸鼠,建立荷淋巴瘤和非小细胞肺癌裸鼠模型,尾静脉注射11.1-14.8MBq/200μL （300-400μCi/200μL）（125）^Ⅰ-2F5并用SPECT进行放射免疫显像,显像前3d开始用l%碘化钾溶液200μL/d灌胃封闭甲状腺,采用ROI（ Region of interest）技术在不同时相的显像图上勾画肿瘤轮廓,并计算瘤体与对侧相同部位的T/B比值。结果:1. （125）^Ⅰ-2F5标记率为（68.12±6.19）%,纯化后纸层析法测得即刻（125）^Ⅰ-2F5的放射化学纯度为（97.67±0.59）%,比活度为756.13 MBq/mg;（125）^Ⅰ-2F5与CD28-T细胞的结合率随细胞数的增加而增加,当细胞数为1×107个时结合率达到最高水平,此时总细胞结合率为（37.31±0.85）%,特异性细胞结合率为（34.44±0.93）%;标记物加入到不同稀释液中后,在4℃条件下,对照组24h后、生理盐水组4h后放化纯仍大于90%;在37℃条件下,对照组24h后、生理盐水组4h后放化纯仍大于90%;人血清组48h后的放化纯为（74.59±2.69）%;2. （125）^Ⅰ-2F5在正常裸鼠和荷淋巴瘤裸鼠体内主要通过肾脏和肝脏代谢;注射（125）^Ⅰ-2F5后,肿瘤组织的放射性分布及肿瘤组织与各组织器官的T/NT比值随时间延长逐渐上升,至24h达到最大值;3.注射（125）^Ⅰ-2F5后,荷淋巴瘤裸鼠放射免疫显像肿瘤清晰可见;荷非小细胞肺癌裸鼠模型的瘤体组织未见明显放射性浓聚。结论:1. Iodogen法（125）^Ⅰ标记单抗2F5的标记率和放化纯高,方法简便,标记物的稳定性好且保持较好的免疫活性。2.SPECT进行放射免疫显像,可获得优质的淋巴瘤放射免疫图像。3.本研究为不同放射性碘(¹²³Ⅰ、（125）^Ⅰ、¹³¹Ⅰ)标记单抗2F5以及建立淋巴瘤的放射免疫显像和靶向治疗方法提供实验依据。

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