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抗HoxA1单克隆抗体的制备、鉴定

作　者: 刘又铭
导　师: 刘卫平；姬西团；甄海宁
学　校: 第四军医大学
专　业: 外科学
关键词: HoxA1 单克隆抗体制备鉴定
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

[目的]利用合成抗原GST-HoxA1免疫BALB/c小鼠,制备针对HoxA1蛋白的单克隆抗体,通过Westen bloting检测其特异性,FITC荧光素标记抗体,免疫荧光染色,研究其在HoxA1蛋白检测中的应用价值。[方法与结果]GST-HoxA1合成抗原免疫BALB/c小鼠,采用传统单克隆抗体制备方法,通过细胞融合,HAT选择,有限稀释法克隆扩增,获得稳定分泌高纯度抗HoxA1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。利用小鼠体内接种杂交瘤细胞制备含特异性抗体的腹水,通过辛酸—硫酸铵法纯化,得到优质单克隆抗体。通过间接ELISA法测定抗体效价,Westen bloting检测其的特异性。经测定抗HoxA1单克隆抗体4D5效价为1:102400,Westen bloting结果发现4D5可以特异性结合靶细胞Hela中HoxA1蛋白,与载体蛋白GST无交叉反应;利用FITC荧光素标记抗体,免疫荧光染色结果显示实验组肿瘤细胞明显荧光表达,对照组细胞仅见极微弱荧光表达。[结论]1.成功制备抗HoxA1单克隆抗体。2.通过Westen bloting证实所制备单克隆抗体可与相应HoxA1蛋白特异性结合,用该抗体检测Hela细胞裂解液,结果在相对分子质量约36×10~3处有反应条带;FITC荧光素标记抗体,免疫荧光染色检测靶细胞Hela,证明该抗体可初步用于HoxA1蛋白检测。

全文目录

缩略语表  6-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-11
前言  11-12
文献回顾  12-21
   一 HOX 同源盒基因  15-19
   二单克隆抗体制备  19-21
1 材料  21-24
  1.1 动物及细胞  21
  1.2 试剂  21-22
  1.3 仪器  22-23
  1.4 耗材  23-24
2 方法  24-38
  2.1 抗HoxA1 单克隆抗体(McAb)制备  24-32
  2.2 抗HoxA1 单克隆抗体扩增  32
  2.3 抗HoxA1 单克隆抗体纯化  32-33
  2.4 抗体效价测定  33-34
  2.5 抗体特异性检测（Western bloting）  34-36
  2.6 免疫荧光化学法检测Hela 细胞中HoxA1 蛋白的表达  36-38
3 结果  38-43
  3.1 抗HoxA1 单克隆抗体制备  38
  3.2 蛋白浓度测定  38
  3.3 抗体效价测定  38-41
  3.4 Western bloting 进行抗体检测  41
  3.5 FITC 标记免疫荧光检测Hela 癌细胞株中HoxA1 的表达  41-43
4 讨论  43-45
  4.1 抗HoxA1 单克隆抗体的制备  43
  4.2 单克隆抗体的纯化（辛酸—硫酸铵法）  43-44
  4.4 同源盒基因HoxA1  44-45
5 结论  45-46
参考文献  46-50
个人简历和研究成果  50-51
致谢  51

抗HoxA1单克隆抗体的制备、鉴定

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