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爪蟾卵母细胞表达体系的建立及其表达的NMDA受体药理学特性的研究

作　者: 刘晓燕
导　师: 郑建全
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 分子药理学
关键词: 爪蟾卵母细胞 内源性电流 NMDA受体电流
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
下　载: 115次
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内容摘要


目的:作为异源性表达载体,非洲爪蟾卵母细胞用于各种蛋白的表达,包括受体、离子通道、转运体等,为研究所表达蛋白的结构、功能及药理学特性提供了重要的手段。本实验旨在建立爪蟾卵母细胞表达体系,并进一步研究所要表达的NMDA受体蛋白的结构及功能。方法:在去除滤泡膜的非洲爪蟾卵母细胞上,建立双电极电压钳记录技术,并使用该技术观察爪蟾卵母细胞表达的内源性递质门控性和电压门控性离子通道电流。将所研究的NMDA受体亚单位NR-1A、NR-2A、NR-2B的cDNA分别体外转录为cRNA后,将其射到爪蟾卵母细胞进行表达。采用双电极电压钳技术证实NR-1A/NR-2A和NR-1A/NR-2B受体的功能性表达。并对所表达的NMDA受体不同亚型的药理学特性进行了研究。结果:灌流液中分别加入NMDA受体、γ-氨基丁酸和烟碱受体激动剂,均未能在未注射外源性cRNA的爪蟾卵母细胞上诱发出电流。去极化刺激仅可诱发出一外向电流。将NR-1A/NR-2A、NR-1A/NR-2B分别注入爪蟾卵母细胞后,灌流液中加入NMDA受体激动剂L-谷氨酸和甘氨酸可在卵母细胞上诱发出内向电流,其中注射过2B亚单位激活的电流可被2B选择性拮抗剂氟哌啶醇阻断,而对注射过2A亚单位激活的电流作用不明显。胍丁胺和苯环壬酯手性化合物能可逆性阻断NMDA受体(NR-1A/NR-2A、NR-1A/NR-2B)电流,其中胍丁胺的阻断作用除具有电压依赖性外还有浓度依赖性。结论:成功建立了爪蟾卵母细胞表达体系,并使用双电极电压钳记录技术,对爪蟾卵母细胞表达的NMDA受体不同亚型的药理学特性进行了研究。研究胍丁胺和苯环壬酯对爪蟾卵母细胞表达的NMDA受体的阻断作用。

全文目录


英文缩写词表  6-7
中文摘要  7-8
Abstract  8-10
引言  10-13
第一章 Axoclamp-2B放大器的调试和使用  13-15
  1 线路连接  13
  2 使用方法  13-15
第二章 爪蟾卵母细胞的内源性外向电流  15-24
  引言  15
  1 材料与方法  15-19
    1．1 材料  15
    1．2 方法  15-19
  2．实验结果  19-22
    2．1 细胞膜被动电学参数  19
    2．2 递质门控性离子通道  19-20
    2．3 电压门控性离子通道  20-22
  3 讨论  22-24
第三章 NMDA受体表达电流及其药理学特性  24-39
  引言  24
  1 材料与方法  24-33
    1．1 材料  24-25
    1．2 方法  25-33
    1．3 电生理记录  33
    1．4 统计学处理  33
  2 实验结果  33-36
    2．1 谷氨酸诱发电流  33
    2．2 谷氨酸诱发电流的浓度依赖性  33-36
    2．3 谷氨酸激活电流与膜电压  36
  3 讨论  36-39
第四章 胍丁胺对爪蟾卵母细胞表达的NMDA受体通道电流的阻断作用初探  39-44
  引言  39
  1 材料与方法  39-40
    1．1 材料  39
    1．2 方法  39-40
    1．3 电生理记录  40
    1．4 统计学处理  40
  2 实验结果  40-42
    2．1 胍丁胺对NMDA受体诱发电流阻断作用的浓度依赖性  40-41
    2．2 不同浓度的胍丁胺对NMDA受体通道电流的抑制率  41
    2．3 胍丁胺阻断电流与膜电压  41-42
  3 讨论  42-44
第五章 盐酸苯环壬酯光学异构体对爪蟾卵母细胞表达的NMDA受体电流的阻断作用  44-48
  引言  44
  1 材料与方法  44-45
    1．1 材料  44
    1．2 方法  44-45
    1．3 电生理记录  45
    1．4 统计学处理  45
  2 实验结果  45-47
    2．1 d-8021和L-8021对NMDA受体诱发电流阻断作用  45-46
    2．2 d-8021和L-8021对NMDA受体通道电流的抑制率  46
    2．3 d-8021和L-8021阻断电流与膜电压  46-47
  3 讨论  47-48
结语  48-49
结论  49-50
参考文献  50-53
致谢  53-54
个人简历  54-55
附图  55-60
发表综述  60-66
  异源性表达载体—爪蟾卵母细胞的内源性离子通道  60-66
实验论文  66-72
  爪蟾卵母细胞双电极电压钳记录技术及其内源性外向电流的研究  66-72
  [参考文献]  72

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学
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