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茶树染色体核型分析及TCS基因在染色体上初步定位

作 者: 章爱军
导 师: 江昌俊
学 校: 安徽农业大学
专 业: 茶学
关键词: 茶树 核型分析 带型分析 原位杂交 基因定位 咖啡碱合成酶基因
分类号: S571.1
类 型: 硕士论文
年 份: 2005年
下 载: 192次
引 用: 4次
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内容摘要


本试验以安徽农业大学茶园中龙井 43 的芽尖、花蕾以及其茶籽培养的幼根为研究对象,采用传统的压片法、去壁低渗法、风油精法三种制片方法,进行系统的比较和分析,这三种方法均能找到茶树体细胞有丝分裂相。常规压片法能检查出茶树染色体数目,并可对其一般形态进行观察分析。去壁低渗方法可进行茶树染色体核型、带型分析以及用于原位杂交。风油精法简化了制片的程序,适合茶树染色体快速计数,也可做核型分析。通过对芽尖和花蕾以及幼根这些材料的比较,表明芽尖是制片方法的最适宜的材料,它易于获取,又便于找有丝分裂相的最佳时间。 通过观察茶树有丝分裂的过程,找出有丝分裂的各个时期,然后对其中期进行核 型 分 析 、 对 其 早 中 期 进 行 G 带 分 析 。 分 析 表 明 , 茶 树 的 核 型 公 式 为2n=30=14m+12sm+2st+2sm(SAT),核型分类属 2B 型,染色体基数为 15,属二倍体;G带分析发现每条染色体均有多重的 G 带带纹,且大部分端粒和着丝粒子都显带纹;不同的染色体和染色体臂在带纹的分布、大小及着色的深浅等方面互有差别;根据带型,同源染色体,染色体臂和区段之间能较好地配对。 本试验利用 PCR 法合成 1.4kb 咖啡碱合成酶基因探针,采取染色体原位杂交方法,将茶树咖啡碱合成酶基因初步定位在第 9 染色体上。这些研究填补了茶树相关基因在染色体上定位这一研究领域的空白,对茶树基因图谱的构建,完善茶树染色体的理论和进一步开展遗传学研究有一定的参考价值。同时,对全面了解该酶基因、以及利用基因工程技术培育出低(高)咖啡碱茶树品种也具有一定的意义。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-8
1 文献综述  8-17
  1.1 茶树染色体研究  8-11
    1.1.1 染色体的制片方法  8-9
      1.1.1.1 常规压片法  8-9
      1.1.1.2 去壁低渗法  9
    1.1.2 核型分析  9
    1.1.3 显带技术  9-11
      1.1.3.1 植物染色体 G 带技术  10
      1.1.3.2 染色体 G 带的研究动态  10-11
  1.2 原位杂交  11-14
    1.2.1 原位杂交技术  11-12
    1.2.2 染色体原位杂交  12-13
    1.2.3 染色体原位杂交技术的建立  13
    1.2.4 染色体原位杂交技术的发展  13-14
  1.3 咖啡碱合成酶  14-17
    1.3.1 茶树中咖啡碱的概况  14
    1.3.2 茶树中咖啡碱生物合成主要途径  14-15
    1.3.3 茶树中咖啡碱合成酶基因研究现状  15-17
2 引言  17-19
  2.1 研究的主要内容、意义和技术路线  17-19
    2.1.1 研究的主要内容  17
    2.1.2 研究的意义  17-18
    2.1.3 研究的技术路线  18-19
3 材料与方法  19-29
  3.1 实验材料  19
  3.2 仪器与试剂  19-21
    3.2.1 主要仪器与设备  19-20
    3.2.2 主要试剂与药品配置  20-21
      3.2.2.1 主要试剂  20
      3.2.2.2 主要药品的配置  20-21
  3.3 方法与步骤  21-29
    3.3.1 染色体的研究  21-24
      3.3.1.1 茶树染色体制片材料的选择  21
      3.3.1.2 制片方法的比较  21-22
      3.3.1.3 茶树细胞的有丝分裂  22
      3.3.1.4 核型分析  22-24
      3.3.1.5 G 带分析  24
    3.3.2 茶树咖啡碱合成酶在染色体上的定位  24-29
      3.3.2.1 原位杂交的制片  24-25
      3.3.2.2 合成探针  25-27
      3.3.2.3 探针处理  27-28
      3.3.2.4 原位杂交  28-29
4. 结果与分析  29-39
  4.1 茶树染色体的研究  29-35
    4.1.1 茶树制片方法与比较  29
    4.1.2 茶树染色体制片材料选择  29-30
    4.1.3 茶树细胞的有丝分裂  30-31
    4.1.4 核型分析  31-33
    4.1.5 茶树G 带分析  33-35
  4.2 茶树咖啡碱合成酶基因定位  35-39
    4.2.1 质粒DNA 的制备  35
    4.2.2 茶树咖啡碱合成酶基因探针及其片段的合成  35-36
    4.2.3 探针处理  36-38
    4.2.4 原位杂交  38-39
5. 讨论  39-42
  5.1 茶树染色体的研究  39-40
  5.2 茶树咖啡碱合成酶基因在染色体定位  40-42
    5.2.1 原位杂交的染色体制片  40
    5.2.2 探针的合成  40-41
    5.2.3 原位杂交  41-42
6 结论  42-43
参考文献  43-49
致谢  49-50
作者简介  50

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