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茶树染色体核型分析及TCS基因在染色体上初步定位
作 者: 章爱军
导 师: 江昌俊
学 校: 安徽农业大学
专 业: 茶学
关键词: 茶树 核型分析 带型分析 原位杂交 基因定位 咖啡碱合成酶基因
分类号: S571.1
类 型: 硕士论文
年 份: 2005年
下 载: 192次
引 用: 4次
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内容摘要
本试验以安徽农业大学茶园中龙井 43 的芽尖、花蕾以及其茶籽培养的幼根为研究对象,采用传统的压片法、去壁低渗法、风油精法三种制片方法,进行系统的比较和分析,这三种方法均能找到茶树体细胞有丝分裂相。常规压片法能检查出茶树染色体数目,并可对其一般形态进行观察分析。去壁低渗方法可进行茶树染色体核型、带型分析以及用于原位杂交。风油精法简化了制片的程序,适合茶树染色体快速计数,也可做核型分析。通过对芽尖和花蕾以及幼根这些材料的比较,表明芽尖是制片方法的最适宜的材料,它易于获取,又便于找有丝分裂相的最佳时间。 通过观察茶树有丝分裂的过程,找出有丝分裂的各个时期,然后对其中期进行核 型 分 析 、 对 其 早 中 期 进 行 G 带 分 析 。 分 析 表 明 , 茶 树 的 核 型 公 式 为2n=30=14m+12sm+2st+2sm(SAT),核型分类属 2B 型,染色体基数为 15,属二倍体;G带分析发现每条染色体均有多重的 G 带带纹,且大部分端粒和着丝粒子都显带纹;不同的染色体和染色体臂在带纹的分布、大小及着色的深浅等方面互有差别;根据带型,同源染色体,染色体臂和区段之间能较好地配对。 本试验利用 PCR 法合成 1.4kb 咖啡碱合成酶基因探针,采取染色体原位杂交方法,将茶树咖啡碱合成酶基因初步定位在第 9 染色体上。这些研究填补了茶树相关基因在染色体上定位这一研究领域的空白,对茶树基因图谱的构建,完善茶树染色体的理论和进一步开展遗传学研究有一定的参考价值。同时,对全面了解该酶基因、以及利用基因工程技术培育出低(高)咖啡碱茶树品种也具有一定的意义。
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全文目录
摘要 3-4 Abstract 4-8 1 文献综述 8-17 1.1 茶树染色体研究 8-11 1.1.1 染色体的制片方法 8-9 1.1.1.1 常规压片法 8-9 1.1.1.2 去壁低渗法 9 1.1.2 核型分析 9 1.1.3 显带技术 9-11 1.1.3.1 植物染色体 G 带技术 10 1.1.3.2 染色体 G 带的研究动态 10-11 1.2 原位杂交 11-14 1.2.1 原位杂交技术 11-12 1.2.2 染色体原位杂交 12-13 1.2.3 染色体原位杂交技术的建立 13 1.2.4 染色体原位杂交技术的发展 13-14 1.3 咖啡碱合成酶 14-17 1.3.1 茶树中咖啡碱的概况 14 1.3.2 茶树中咖啡碱生物合成主要途径 14-15 1.3.3 茶树中咖啡碱合成酶基因研究现状 15-17 2 引言 17-19 2.1 研究的主要内容、意义和技术路线 17-19 2.1.1 研究的主要内容 17 2.1.2 研究的意义 17-18 2.1.3 研究的技术路线 18-19 3 材料与方法 19-29 3.1 实验材料 19 3.2 仪器与试剂 19-21 3.2.1 主要仪器与设备 19-20 3.2.2 主要试剂与药品配置 20-21 3.2.2.1 主要试剂 20 3.2.2.2 主要药品的配置 20-21 3.3 方法与步骤 21-29 3.3.1 染色体的研究 21-24 3.3.1.1 茶树染色体制片材料的选择 21 3.3.1.2 制片方法的比较 21-22 3.3.1.3 茶树细胞的有丝分裂 22 3.3.1.4 核型分析 22-24 3.3.1.5 G 带分析 24 3.3.2 茶树咖啡碱合成酶在染色体上的定位 24-29 3.3.2.1 原位杂交的制片 24-25 3.3.2.2 合成探针 25-27 3.3.2.3 探针处理 27-28 3.3.2.4 原位杂交 28-29 4. 结果与分析 29-39 4.1 茶树染色体的研究 29-35 4.1.1 茶树制片方法与比较 29 4.1.2 茶树染色体制片材料选择 29-30 4.1.3 茶树细胞的有丝分裂 30-31 4.1.4 核型分析 31-33 4.1.5 茶树G 带分析 33-35 4.2 茶树咖啡碱合成酶基因定位 35-39 4.2.1 质粒DNA 的制备 35 4.2.2 茶树咖啡碱合成酶基因探针及其片段的合成 35-36 4.2.3 探针处理 36-38 4.2.4 原位杂交 38-39 5. 讨论 39-42 5.1 茶树染色体的研究 39-40 5.2 茶树咖啡碱合成酶基因在染色体定位 40-42 5.2.1 原位杂交的染色体制片 40 5.2.2 探针的合成 40-41 5.2.3 原位杂交 41-42 6 结论 42-43 参考文献 43-49 致谢 49-50 作者简介 50
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中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 经济作物 > 饮料作物 > 茶
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