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板蓝根抗真菌蛋白的色谱分离与质谱鉴定

作　者: 郭翠娟
导　师: 李兴广；潘映红
学　校: 北京中医药大学
专　业: 中药学
关键词: 板蓝根菘蓝活性蛋白抗真菌色谱分离纯化质谱鉴定
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

本文综述部分介绍了中药板蓝根的古代记载与现代研究概况,包括板蓝根的化学成分、药理作用、临床应用、大分子成分研究现状、中药抗真菌成分研究进展等,同时介绍了蛋白质组学技术在医药领域的应用和现代常用蛋白质研究技术。在实验部分,进行了 200 余种中药鲜品的抗真菌活性筛选,结果发现板蓝根具有很强的抗真菌活性,并证实其活性成分为蛋白质;进一步将大量将鲜板蓝根洗净剪碎,加入五倍蛋白抽提缓冲液,经过匀浆、离心、硫酸铵分级沉淀,透析等步骤及抗真菌活性测定,确定 30-40%和 40-55%饱和硫酸铵沉淀的组分活性较强,可用于色谱分离纯化;活性组分先用阳离子交换柱 SP-Sepharose Fast Flow(26/30)进行色谱分离,将有活性的粗分离组分继续用高分辨率阳离子交换预装柱 Mono S (1mL) 进行色谱分离,收集的活性部分重复用 Mono S 柱进行分离,得到的活性峰经疏水预装柱 RESUORCE ISO (1mL) 分离,得到了三个蛋白,分别对绿色木霉、小麦赤霉、杨树溃疡、稻瘟、小麦全蚀、腐霉、芦笋茎枯、黄瓜枯萎等真菌均有较强抑制作用;SDS-PAGE 分析显示,三个样品分别为明显的条带,纯度很高;经基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF)分析,可确定三个蛋白的精确分子量分别为 26642D、31968D 和 22307D;对 SDS-PAGE 后的蛋白带挖点,胶内酶切后,进行了肽指纹图谱分析与网上数据库比对,确定三个蛋白是新的抗真菌蛋白。随着社会发展,各类皮肤真菌病,还有因免疫缺陷或抑制、恶性肿瘤等所致的真菌病等发病率在不断上升,危害很大,然而行之有效的抗真菌药物相对较少,而且有些药物存在严重的毒副作用或易发生耐药,因此寻找安全性好、抗菌谱广、疗效高且价格低的抗真菌药物仍是一项艰巨的任务。抗真菌肽或蛋白抗真菌的机理主要为干扰真菌细胞的表面结构,溶解细胞壁,从而达到抗菌作用,作用机制不同于常用抗生素,因而也不易产生耐药性,是今后看好的一类抗真菌药物。所以,本研究为抗真菌药物的开发提供了新的线索。

板蓝根抗真菌蛋白的色谱分离与质谱鉴定

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