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微丝骨架在橡胶树采胶中作用的研究

作　者: 高政权
导　师: 郝秉中
学　校: 华南热带农业大学
专　业: 植物学
关键词: 巴西橡胶树乳管伤害微丝骨架肌动蛋白 TRITC-phalloidin荧光标记显微技术微丝骨架解聚剂
分类号: S794.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2002年
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内容摘要

以成年巴西橡胶树为材料，用异硫氰酸四甲基罗丹明标记的鬼笔环肽荧光标记显微光学技术和免疫印迹技术研究了橡胶树割口树皮中乳管伤口的微丝骨架和外排胶乳中肌动蛋白含量在排胶过程中的变化。研究结果表明，4％多聚甲醛加0.5％戊二醛(0.1mol/lPBS，pH7.2缓冲液)固定，55℃高温石蜡包埋的材料能较好地保存橡胶树乳管细胞中的微丝骨架。用荧光显微镜观察到，停止排胶时，乳管伤口有一团发橙红色荧光的物质，这可能就是乳管伤口蛋白质网中的微丝骨架。用免疫印迹技术证明：在割胶收集的胶乳中肌动蛋白主要分布在C乳清(乳管细胞的细胞质)中；割胶后立即收集的胶乳中肌动蛋白含量最高，随着排胶过程的进行，肌动蛋白含量逐渐降低。施用微丝骨架的解聚剂大环内酯和碘化钾进行刺激采胶实验，结果表明：施用1％的碘化钾和饱和浓度的大环内酯水溶液能使胶乳产量增加；但施用高浓度的碘化钾能造成树皮严重伤害。

全文目录

目录  2-6
中文摘要  6-7
缩略词表  7-8
引言  8-10
国内外研究进展  10-19
  1 植物微丝的研究进展  10-16
    1．1 植物中肌动蛋白的发现  10
    1．2 植物肌动蛋白的性质  10-11
    1．3 植物肌动蛋白的功能  11-13
    1．4 鉴定植物肌动蛋白的方法  13-14
    1．5 分离植纯化植物肌动蛋白的方法  14-15
    1．6 肌动蛋白的分子生物学研究  15-16
  2 橡胶树乳管的肌动蛋白和它可能的功能  16-19
    2．1 橡胶树管细胞的结构和细胞骨架  16-17
    2．2 细胞骨架与橡胶树产胶和排胶  17
    2．3 细胞骨架与橡胶树乳管死亡  17-18
    2．4 细胞骨架与乳管伤口的堵塞和愈合  18-19
材料与方法  19-29
  1 实验材料  19
  2 实验设计与实验方法  19-25
    2．1 TRITC-phalloidin荧光标记，石蜡包埋显示橡胶树乳管中的微丝骨架  19-22
      2．1．1 采样  19
      2．1．2 标本固定液的选择  19
      2．1．3 标本固定时间的确定  19
      2．1．4 标本脱水及浸蜡时间的选择  19-21
      2．1．5 标本包埋剂的选择  21
      2．1．6 切片脱蜡  21
      2．1．7 染色时间和染色剂浓度的选择  21
      2．1．8 荧光显微镜下观察、照相  21-22
    2．2 SDS-PAGE和Western-blotting  22-24
      2．2．1 样品的采集和处理  22-23
      2．2．2 橡胶树肌动蛋白提取液的选择  23
      2．2．3 SDS-PAGE  23-24
    2．3 微丝解聚剂碘化钾和大环内酯刺激采胶实验  24-25
      2．3．1 药品的配制  24
      2．3．2 实验树的选择  24-25
      2．3．3 涂药  25
      2．3．4 生理参数的测定  25
      2．3．5 实验结果用国际通用的SAS生物软件作统计分析  25
  3 有关试剂的配制  25-27
    3．1 荧光标记显微观察所需试剂  25-26
    3．2 SDS-PAGE和Western-blotting所需试剂  26-27
  4 药品来源  27-29
结果  29-40
  1 乳管细胞微丝TRITC-phalloidin荧光标记显微观察  29-30
    1．1 最佳实验条件的选择  29-30
      1．1．1 标本的最佳固定液  29
      1．1．2 标本的最佳固定时间  29
      1．1．3 标本的最佳包埋剂  29
      1．1．4 标本的脱水及浸蜡以酒精—二甲苯系列较好  29
      1．1．5 切片脱蜡以二甲苯效果较好，松节油的效果较差  29
      1．1．6 切片的最佳染色时间和最佳染色液浓度  29-30
    1．2 荧光标记显微观察实验结果  30
  2 橡胶树胶乳中肌动蛋白SDS-PAGE和Western-blotting的结果  30-35
    2．1 橡胶树胶乳中肌动蛋白的最佳提取液的确定  30
    2．2 Western-blotting  30-32
    2．3 肌动蛋白在橡胶树胶乳中的分布  32-33
    2．4 肌动蛋白与排胶的关系  33-34
    2．5 肌动蛋白与产胶的关系  34-35
  3 微丝解聚剂碘化钾和大环内酯刺激采胶实验结果  35-40
    3．1 胶乳产量  35
    3．2 生理参数分析  35-39
      3．2．1 胶乳的干胶含量  35
      3．2．2 胶乳的总固形物含量  35
      3．2．3 胶乳的蔗糖含量  35-39
      3．2．4 胶乳的无机磷含量  39
      3．2．5 胶乳的硫醇含量  39
      3．2．6 胶乳的镁离子含量  39
    3．3 施用高浓度的碘化钾对橡胶树产生了药害  39-40
讨论  40-46
  1 关于荧光显微技术显示植物细胞中的微丝骨架的方法  40-43
    1．1 化学固定法可以在光镜水平较好地固定橡胶树乳管细胞中的微丝骨架  40-41
    1．2 关于高熔点的石蜡能否保存橡胶树乳管细胞中的微丝骨架的问题  41-42
    1．3 TRITI-phalloidin染色后落射式荧光显微镜下观察到的发荧光物质为橡胶树乳管细胞中的微丝骨架  42-43
  2 关于免疫印迹技术显示橡胶树外排胶乳中肌动蛋白的问题  43-44
    2．1 牛血清白蛋白比脱脂牛奶更适合做橡胶树胶乳中肌动蛋白免疫印迹的封闭液  43
    2．2 免疫印迹结果表明橡胶树的肌动蛋白主要分布在C乳清中  43
    2．3 割胶时，微丝骨架在乳管伤口堵塞中的作用  43-44
  3 低浓度的碘化钾和饱和浓度的大环内酯作为微丝的解聚剂，短期内确实能增加胶乳的产量  44-46
结论  46-47
参考文献  47-55
英文摘要  55-57
附录：橡胶树中的橡胶素  57-61
  1 橡胶树中橡胶素提取液的选择  58
  2 SDS-PAGE样品的  58
  3 SDS-PAGE  58
  4 结果与讨论  58-61
参考文献  61-63
致谢  63-64
图版及说明  64-66

微丝骨架在橡胶树采胶中作用的研究

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