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细胞骨架破坏对体外培养兔软骨细胞基质代谢分泌的影响

作　者: 曹晓明
导　师: 卫小春
学　校: 山西医科大学
专　业: 骨外科学
关键词: 软骨细胞肌动蛋白微管蛋白波形蛋白二型胶原糖胺多糖
分类号: R684.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

研究背景:随着老龄化进程加快和体育运动普及,骨性关节炎(osteoarthritis,OA)、关节软骨损伤等软骨细胞相关疾病逐年增加。有大量的研究表明细胞骨架(cytoskeleton,CSK)在软骨退变及OA发生的过程有着明显改变。本课题目的就在于探讨细胞骨架的三种成分在软骨细胞基质代谢中的作用,进而揭示骨性关节炎软骨细胞退变发病机理。同时可以应用某些调节细胞骨架成分降解的手段来干预骨性关节炎发生、发展的负面作用,为骨性关节炎的治疗开辟新的途径。目的:利用激光扫描共聚焦显微镜(laser confocal scanning microscope,LCSM)观察软骨细胞CSK形态,并对软骨细胞CSK蛋白荧光强度进行定量测定,观察正常与加入三种细胞骨架破坏剂的软骨细胞CSK形态及蛋白量以确定CSK破坏是否有效。在明确了细胞骨架微丝、微管和中间纤维三种成分被相应的细胞骨架破坏剂破坏以后分析微丝、微管和中间纤维三种细胞骨架(cytoskeleton, CSK)成分破坏对体外培养关节软骨细胞基质代谢(Ⅱ型胶原和糖胺多糖)的影响。方法:取2月龄新西兰大白兔10只,取双膝关节软骨行软骨细胞培养,待细胞贴壁后,随机分为四组,即正常对照组、微丝破坏组(加入0.01mg/L细胞松弛素-D破坏肌动蛋白)、微管破坏组(加入0.4mg/L秋水仙素破坏微管蛋白)、中间纤维破坏组(加入175mg/L丙烯酰胺破坏波形蛋白)。培养3天后,各组取部分细胞消化并爬片,行免疫荧光染色及共聚焦显微镜荧光值半定量检测。观察各组细胞微丝蛋白、微管蛋白和波形蛋白的形态及含量变化。并于培养第3、6、9天取各组细胞上清液,用ELISA法和阿尔新蓝法检测各组上清液中Ⅱ型胶原和糖胺多糖(proteoglycan,GAG)的含量。结果:软骨细胞微丝呈丝状,分布在细胞质膜的内侧,沿细胞外围轮廓排列,微丝破坏后可见微丝细胞外围的增亮固体环减弱。微管在核周呈放射状散向整个细胞,微管破坏组可见微管解聚,蛋白结构稀疏。波形蛋白呈细丝状,形成相互交织的贯穿胞质的网状结构,中间纤维破坏组可见细胞变圆,蛋白荧光减低。对三种骨架蛋白成分的平均荧光值进行相应的分析,可见相应CSK破坏组荧光值与对照组相比均明显降低(p<0.05)。同时,微管破坏组和中间纤维破坏组在第3、6、9天上清液中的Ⅱ型胶原和GAG含量均明显低于对照组(p<0.05),而微丝破坏组与对照组在第3、6、9天上清液中的Ⅱ型胶原和GAG含量均无统计学差异。结论:预设浓度的CSK破坏剂可以破坏软骨细胞相应的CSK成分,使特定的CSK成分荧光度明显降低,且微管和中间纤维破坏组在单层培养3,6,9天时软骨细胞上清液中Ⅱ型胶原和糖胺多糖含量显著下降,而微丝破坏组在单层培养3,6,9天时对软骨细胞上清液中的Ⅱ型胶原和糖胺多糖含量无明显影响。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-9
前言  9-10
材料与方法  10-17
结果  17-23
讨论  23-25
结论  25-26
参考文献  26-27
综述  27-37
  参考文献  34-37
个人简历  37
硕士研究生期间发表文章  37-38
致谢  38

细胞骨架破坏对体外培养兔软骨细胞基质代谢分泌的影响

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