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水稻抗病基因同源序列多态性分析

作　者: 刘国权
导　师: 李景鹏；杨文玉
学　校: 东北农业大学
专　业: 作物遗传育种
关键词: 抗病基因同源序列水稻稻瘟病生理小种相关系数分子标记
分类号: S435.111
类　型: 硕士论文
年　份: 2002年
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内容摘要

本文选用了S2-inv/As3-inv、Ptokin1/Ptokin2、NLRR-for/NLRR-rev、NLRR-inv1/NLRR-inv2、XLRR-for/RR-rev、CLRR-for/CLRR-rev、RLRR-for/RLRR-rev7对抗病基因同源序列引物，对东农415、垦92-509、牡丹江19、空育131等24个粳稻和1个籼稻材料进行RGA分析，并对芦苇、稗草、菰、玉米4个水稻远缘材料进行RGA分析，得到了687条RGA扩增带，品种间差异谱带227条。对持久抗性品种东农415RGA产物谱带进行回收，将回收产物连接到pMD-18T载体上，转化到JM109菌株中，得到了69个阳性克隆，提取重组质粒并进行紫外检测结果表明：RGA已经转化到了JM109中。对7对引物扩增的RGA产物谱带与抗稻瘟病鉴定结果进行了线性回归分析，结果表明：其相关系数介于-0.3209-0.1243之间，线性相关系数未达到显著水平。对黑龙江农垦科学院水稻研究所培育的一系列品种与7对PCR扩增产物谱带的相关性进行了分析，它们的相关性较好，其相关系数介于-0.8104-0.3223之间，第5对引物的扩增产物与农垦水稻所培育的品种抗叶瘟鉴定结果相关系数为：-0.8104，达到显著水平。RGA分析结果多态性较高，可用于进行品种鉴定和种质资源分析，为以后开展利用品种抗病基因多态性控制稻瘟病发生、选育抗病品种和配制杂交组合等方面工作打下了良好的实验基础。对东农415RGA产物进行克隆和测序，为以后分析、寻找、克隆抗稻瘟病基因奠定了实验基础。对实验材料的抗稻瘟病进行了鉴定，结果表明：垦稻7号、东农415、垦92-509、沙沙尼、一目惚、绥粳3号、IR58无论叶瘟还是穗颈瘟抗病性都强；富士光、新越光、星之梦、合江19、黑粳99-1016、道北52无论叶瘟还是穗颈瘟抗病性都弱。

全文目录

中文摘要  5-6
英文摘要  6-7
1 前言  7-18
  1．1 文献综述：  7-17
    1．1．1 水稻病害研究概况  7-10
      1．1．1．1 水稻稻瘟病研究概况  7-9
      1．1．1．2 水稻其他主要病害研究概况  9-10
    1．1．2 分子标记在水稻抗病育种上的研究和应用  10-14
      1．1．2．1 分子标记的主要方法  10-12
      1．1．2．2 主要分子标记的特性比较  12
      1．1．2．3 分子标记在水稻抗病育种中的应用  12-14
    1．1．3 同源序列在抗病基因研究中的应用  14-17
      1．1．3．1 同源序列的分类  15
      1．1．3．2 同源序列标记应用  15-16
      1．1．3．3 分析抗性基因的同源序列  16-17
  1．2 课题研究的目的和意义  17-18
2 水稻抗病基因多态性分析  18-32
  2．1 材料与方法  18-24
    2．1．1 实验材料和仪器  18-21
      2．1．1．1 实验生物材料  18
      2．1．1．2 实验耗材和化学试剂  18
      2．1．1．3 实验仪器  18-19
      2．1．1．4 配制实验溶液  19-20
      2．1．1．5 同源序列引物  20-21
    2．1．2 实验方法  21-24
      2．1．2．1 水稻总DNA的提取  21
      2．1．2．2 水稻总DNA浓度的测定  21
      2．1．2．3 水稻总DNA紫外检测  21-22
      2．1．2．4 RGA实验分析  22
      2．1．2．5 RGA产物紫外检测  22
      2．1．2．6 RGA产物的回收及紫外检测  22-23
      2．1．2．7 RGA产物克隆  23-24
      2．1．2．8 重组转化子的提取和紫外检测  24
  2．2 结果与分析  24-30
    2．2．1 水稻总DNA的浓度测定结果  24-26
    2．2．2 水稻总DNA紫外检测结果  26
    2．2．3 RGA紫外检测和RGA引物分析  26-29
    2．2．4 同源序列PCR产物片段回收紫外检测结果  29-30
    2．2．5 重组转化子的结果及其紫外检测  30
  2．3 讨论  30-32
    2．3．1 水稻总DNA的提取  30
    2．3．2 同源序列引物的设计  30
    2．3．3 PCR实验程序的优化  30-31
    2．3．4 同源序列分析的优越性、稳定性和重复性  31
    3．2．5 重组子的转化和提取  31-32
3 水稻材料抗稻瘟病鉴定及其与抗病基因多态性的关系  32-37
  3．1 材料与方法  32-33
    3．1．1 实验材料  32
    3．1．2 实验材料田间管理  32
    3．1．3 病原菌的来源和培养  32
    3．1．4 田间调查和接种试验  32-33
  3．2 结果与分析  33-35
    3．2．1 抗稻瘟病病鉴定结果  33-34
    3．2．2 抗病基因多态性和抗稻瘟病鉴定结果的相互关系  34-35
  3．3 讨论  35-37
    3．3．1 病原菌的选择  35
    3．3．2 抗稻瘟病鉴定影响因素  35
    3．3．3 抗稻瘟病鉴定与抗病基因多态性的关系  35-37
4 结论  37-38
  4．1 RGA同源序列分析结果  37
  4．2 抗稻瘟病鉴定分析结果  37-38
参考文献  38-42
致谢  42-43
缩写词  43

水稻抗病基因同源序列多态性分析

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