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蟹源假单胞菌致病机理的研究

作　者: 江定丰
导　师: 李槿年；余为一
学　校: 安徽农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 河蟹细菌鉴定粘附性内毒素胞外产物水体环境因素致病机理
分类号: S945
类　型: 硕士论文
年　份: 2002年
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内容摘要

应用细菌学和分子生物学方法对本实验室分离的一株蟹源致病菌（X-1株）进行了鉴定和致病机理的研究。首先，根据细菌的形态、生理生化特性和血清学反应等常规鉴定和细菌编码鉴定，确定其为假单胞菌。其次，对该株细菌进行了致病性测定。细菌对小鼠和河蟹均具有致病性，死亡率分别为100％（8／8）和87.5％（7／8）。对小鼠的半数致死量(LD₅₀为2.9×10⁷CFU／只。同时，还研究了环境对细菌致病性的影响。结果显示，在30℃、25℃和20℃的水温下细菌对河蟹致死率分别为100％、80％和60％；水体pH值在5.0和10.0时，10h内细菌对河蟹的致死率均为100％，而pH 7.5时，致死率仅为40％。充气与不充气条件下细菌在10h内对河蟹的致死率分别为60％和100％。表明环境因素影响细菌对河蟹的致病性。此外，该菌还具有凝集鸡、小鼠、牛、鲫鱼、鲢鱼、兔、家鸽的红细胞和粘附Hela细胞的能力，表明其具有较强的粘附侵袭力。进一步测定了细菌的内毒素和胞外产物（ECP）的致病作用。采用三氯乙酸（TCA）溶解法提取的细菌内毒素脂多糖的致病性实验结果显示，LPS可引起河蟹发病，但不能导致河蟹死亡，说明该菌内毒素毒力较弱。在培养温度为20℃、25℃和30℃条件下细菌产生的胞外产物提取物中的蛋白质含量分别为3.107mg／mL、3.952mg／mL和3.372mg／mL。SDS-PAGE电泳图谱显示，不同温度组间的大部分蛋白条带无明显差异，只有相对分子量为54 000蛋白条带差异较明显。三组的ECP均具有溶血性，但均无细胞毒性和酪蛋白酶活性；三种温度的ECP对河蟹均有致病性，但死亡率不同，分别为60％（25℃ ECP）、20％（20℃ ECP）和20％（30℃ ECP）。综上所述，本实验室分离的蟹源细菌X-1株为假单胞菌弱毒株，其对河蟹的致病机理主要是粘附素，内毒素和胞外产物中的溶血素等毒性蛋白的共同作用。

全文目录

中文摘要  6-7
英文摘要  7-9
引言  9-10
文献综述：假单胞菌致病机理研究进展  10-18
  1 假单胞菌分类地位  10
  2 生物学特性  10-11
  3 流行病学  11-12
  4 致病因子  12-16
  5 研究展望  16-18
材料与方法  18-24
  1 材料  18-19
  2 方法  19-24
    2．1 细菌的复苏  19
    2．2 细菌的鉴定  19-20
      2．2．1 形态观察  19
      2．2．2 细菌的培养特性  19
      2．2．3 生理生化特性测定  19-20
      2．2．4 细菌凝集试验  20
      2．2．5 细菌的编码鉴定  20
      2．2．6 细菌的药敏试验  20
    2．3 细菌的致病性试验  20-21
      2．3．1 小鼠致病性试验  20
      2．3．2 河蟹回归试验  20-21
      2．3．3 细菌毒力测定  21
    2．4 细菌毒力因子测定  21-24
      2．4．1 细菌血凝性测定  21
      2．4．2 细菌的细胞粘附试验  21-22
      2．4．3 三氯乙酸法提取细菌的内毒素  22
      2．4．4 内毒素致病性试验  22
      2．4．5 细菌胞外产物（ECP）的提取  22-23
      2．4．6 Folin-酚法测定ECP粗提物中蛋白含量  23
      2．4．7 ECP SDS-PAGE电泳  23
      2．4．8 ECP粗提物生物学特性测定  23-24
        2．4．8．1 细胞毒性测定  23
        2．4．8．2 溶血性测定  23
        2．4．8．3 血凝性测定  23
        2．4．8．4 蛋白酶测定  23
        2．4．8．5 ECP对河蟹致病性试验  23-24
结果与分析  24-38
  1 细菌的鉴定结果  24-28
    1．1 细菌形态、染色特性  24
    1．2 细菌的培养特性  24
    1．3 细菌的生理生化特性  24-25
    1．4 细菌凝集试验  25-26
    1．5 编码鉴定  26-27
    1．6 药敏试验  27-28
  2 细菌的致病性试验结果  28-31
    2．1 小鼠致病性试验结果  28
    2．2 河蟹回归试验结果  28
    2．3 细菌毒力测定结果  28-29
    2．4 影响细菌致病性的水体环境  29-31
  3 毒力因子测定结果  31-38
    3．1 细菌血凝试验结果  31
    3．2 细菌的粘附性测定结果  31-32
    3．3 内毒素对河蟹致病性试验结果  32-33
    3．4 ECP蛋白质含量与SDS-PAGE电泳结果  33-34
      3．4．1 蛋白质含量测定  33-34
      3．4．2 SDS-PAGE电泳结果  34
    3．5 ECP粗提物生物学特性测定结果  34-38
      3．5．1 细胞毒测定结果  34-35
      3．5．2 溶血性测定  35-36
      3．5．3 血凝性测定结果  36
      3．5．4 蛋白酶测定结果  36-37
      3．5．5 ECP对河蟹致病性试验结果  37-38
讨论  38-41
结论  41-42
参考文献  42-50
附录  50-51
致谢  51-52
作者简介  52

蟹源假单胞菌致病机理的研究

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