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1、EGCG对原代培养大鼠皮层神经元氧糖剥夺后氨基酸递质释放的影响 2、HEK-293转染细胞L-type Ca_(v1.2)钙通道电生理研究

作　者: 丁杰
导　师: 郭莲军
学　校: 华中科技大学
专　业: 药理学
关键词: 表没食子儿茶素没食子酸酯氧糖剥夺 MTT LDH 高效液相氨基酸人胚肾293细胞 L-type Cav1.2 S1905 依拉地平
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

第一部分EGCG对原代培养大鼠皮层神经元氧糖剥夺后氨基酸递质释放的影响目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对原代培养的大鼠乳鼠皮质神经元缺氧缺糖损伤的保护作用及可能的作用机制。方法:1.应用原代培养大鼠乳鼠皮质神经元,诱导氧糖剥夺损伤模型,在氧糖剥夺4小时之前,预先给予EGCG （25μmol/L、50μmol/L和100μmol/L）,钙过MTT和乳酸脱氢酶的测定观察EGCG对原代培养的皮层神经元缺氧缺糖损伤的保护作用。2.使用高效液相色谱法,测定皮层细胞外液中兴奋性氨基酸天冬氨酸、谷氨酸及抑制性氨基酸牛磺酸、甘氨酸及γ-氨基丁酸的含量。结果:1.低浓度的EGCG （25μmol/L和50μmol/L）对皮层细胞氧糖剥夺损伤具有保护作用,但是高浓度的EGCG （100μmol/L）则没有显示对细胞的保护作用。2. EGCG能显著抑制培养的皮层细胞氧糖剥夺（oxygen–glucose deprivation,OGD）损伤后兴奋性氨基酸谷氨酸的释放,EGCG预处理组与单纯损伤组细胞培养液中谷氨酸水平的比较显示差异有统计学意义（P < 0.05）;EGCG预处理能增加培养液中抑制性氨基酸甘氨酸及γ-氨基丁酸水平。结论:EGCG在一定剂量范围内对原代培养的大鼠皮层神经元氧糖剥夺损伤具有保护作用,其保护作用可能与氧糖剥夺损伤后减少兴奋性氨基酸水平而相应的升高抑制性氨基酸的含量,从而使氧糖剥夺损伤后兴奋性与抑制性氨基酸神经递质水平达到新的平衡有关。第二部分HEK-293转染细胞L-typeCa_V1.2钙钙钙电生理研究目的:钙过对人胚肾293细胞（HEK-293细胞）的研究,观察基因突变的细胞与正常细胞的L-typeCa_V1.2钙钙钙电生理研究。方法: 1.转染HEK-293细胞;2.使用电生理膜片钳方法,保持电位-80mV,施予-40～+60mV,阶跃为10 mV,400ms去极化脉冲,复极至-40mV记录L-typeCa_V1.2钙电流。结果:在钙钙钙的C末端S1905处截断,此突变体我们定义为‘STOP’突变。电流于-20 mV时开始被激活,在-20mV～+60mV呈电压依赖性。突变后所记录的电流幅度与Control组比较明显下降（P < 0.05）,差异具有统计学意义。给予工具药依拉地平(Isradipine,L-typeCa_V1.2钙离子钙钙的阻断剂,购自Sigma公司)电流幅度急速降低,证实此电流为L-typeCa_V1.2电流。结论:突变后的STOP突变体相对于对照组电流幅度明显降低,说明钙钙钙S1905后C末端残基的相互作用对改变钙电流的幅度有重要的意义。

全文目录

英文略缩语  5-6
中文摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-14
  参考文献  12-14
第一部分 EGCG 对原代培养大鼠皮层神经元氧糖剥夺后氨基酸递质释放的影响（国内完成）  14-37
  一.EGCG 对原代培养大鼠皮层细胞氧糖剥夺损伤的保护作用  14-25
    1. 材料与方法  14-19
    2. 结果  19-23
    3. 讨论  23-24
    参考文献  24-25
  二.EGCG 对原代培养大鼠皮层细胞氧糖剥夺损伤后培养液中氨基酸递质含量的影响  25-37
    1. 材料与方法  25-29
    2. 结果  29-34
    3. 讨论  34-35
    参考文献  35-37
第二部分:HEK-293 转染细胞 L-type Cav1.2钙钙钙电生理研究 (国外进行)  37-48
  1. 材料与方法  37-43
  2. 结果  43-46
  3. 讨论  46-47
  参考文献  47-48
全文总结及创新点  48-49
文献综述  49-60
  参考文献  56-60
致谢  60

1、EGCG对原代培养大鼠皮层神经元氧糖剥夺后氨基酸递质释放的影响 2、HEK-293转染细胞L-type Ca_(v1.2)钙通道电生理研究

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