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GRP78在肿瘤中的表达及衣霉素对其诱导表达

作　者: 马媛
导　师: 沈关心
学　校: 华中科技大学
专　业: 免疫学
关键词: 葡萄糖调节蛋白(GRP78) 胃癌肿瘤细胞株衣霉素诱导
分类号: R730.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

背景与目的葡萄糖调节蛋白78(GRP78)是热休克蛋白70家族的成员之一,作为一种内质网中的分子伴侣,GRP78在维持细胞内环境的稳态方面发挥了重要作用。近年来研究发现GRP78在许多肿瘤中高表达,并与肿瘤的增殖,转移,耐药性有关,使GRP78与肿瘤关系的研究成为一个热点。但目前国内外欠缺GRP78在胃癌组织及各种肿瘤细胞株中表达状况的研究。本文旨在探讨GRP78在胃癌组织和肿瘤细胞株中的表达,以及衣霉素诱导GRP78在黑色素瘤细胞株A375中表达,为进一步作为肿瘤靶点研究奠定基础方法1.采用SYBR Green I实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测12例胃癌组织及正常胃组织中GRP78 mRNA的表达水平,免疫组化方法检测石蜡切片中GRP78的蛋白表达水平,运用SPSSl5.0统计软件进行统计分析其表达的差异。2.通过SYBR Green I real-time PCR检测GRP78在肝细胞株L02和肿瘤细胞株HepG2、7721、A373、RaJi、K562、MCF-7、AGS和HeLa中mRNA的表达。采用流式细胞术间接免疫荧光法检测GRP78蛋白在各个细胞株中胞膜和胞浆的分布。3.体外用4μg/m1衣霉素处理A375细胞株(黑色素瘤细胞),分别在处理后2h、6h、12h及24h收集细胞,DMSO处理A375细胞作为对照。采用real-time PCR检测GRP78 mRNA,采用流式细胞术免疫间接荧光法检测胞浆蛋白水平。结果1.胃癌组织中GRP78的mRNA表达水平高于正常胃组织(P<0.05),免疫组化检测显示,胃癌组织中胞浆染色GRP78阳性细胞的比例明显高于正常胃组织,差异有统计学意义(P<0.05)。2.在L02、HepG2、Raji及K562细胞株中GRP78 mRNA的表达无显著差异,GRP78 mRNA在A375细胞株中表达量低于L02, GRP78 mRNA在7721、MCF-7、AGS、HeLa细胞株中表达量高于L02。在L02和上述各肿瘤细胞株中,胞膜GRP78在MCF-7中有一定的表达,其他细胞株不表达或少量表达。在所检测的细胞株中AGS的GRP78 mRNA和胞浆蛋白表达水平最高。3.在4μg/m1衣霉素作用A375细胞株2h时,可诱导GRP78 mRNA和蛋白表达,12h时,蛋白和mRNA表达水平达到高峰,24h时,GRP78 mRNA和蛋白水平都出现下降。结论胃癌组织中GRP78高表达,主要位于细胞质,胃癌细胞株AGS中GRP78高表达,主要位于细胞质。进一步研究证明N-糖基化抑制剂衣霉素能够诱导黑色素瘤细胞株A375中GRP78的表达,且其表达水平具有一定的时间依赖性。

全文目录

英文缩略词表  5-6
中文摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-13
  参考文献  12-13
实验材料  13-16
实验方法  16-22
实验结果  22-32
讨论  32-36
小结  36-37
参考文献  37-39
综述  39-53
  参考文献  48-53
致谢  53

GRP78在肿瘤中的表达及衣霉素对其诱导表达

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