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SELDI-TOF-MS技术检测腹腔热灌注化疗治疗恶性腹水的机制

作　者: 王亚威
导　师: 崔书中
学　校: 广州医学院
专　业: 肿瘤外科学
关键词: CHIPC 恶性腹水 SELDI-TOF-MS 蛋白质组学
分类号: R730.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


恶性腹水是腹腔恶性肿瘤晚期的常见的并发症,是降低患者生活质量的主要因素之一,腹水所致的腹胀、腹痛严重影响着患者的生存质量,临床治疗困难。腹腔热灌注化疗( Continuous Hyperthermic Intraperitoneal Perfusion Chemotherapy,CHIPC)治疗恶性腹水有明显的优势,用于恶性腹水的治疗已取得了很好的的成效,但目前对腹腔热灌注化疗治疗恶性腹水的机制缺乏了解。本课题拟应用SELDI-TOF-MS技术检测胃癌并恶性腹水患者腹腔热灌注化疗治疗前后血清、腹水中蛋白质图谱的差异,分析胃癌并恶性腹水患者腹腔热灌注化疗治疗前后血清、腹水中差异蛋白,并将差异蛋白放入匹兹堡大学生物医学信息学系蛋白质组学实验数据库(EPO-KB)中,根据m/z值对两组均高表达的差异蛋白进行检索,以探讨CHIPC治疗恶性腹水的分子生物学机制。材料和方法:1.病例和对照组选择:广州医学院附属肿瘤医院2008年10月至2009年3月收治的的胃癌并大量腹水患者8例,CHPPC治疗后腹水全部消失,临床疗效评价为完全缓解。2. SELDI-TOF-MS检测:经过处理将血清、腹水样本加到WCX2的芯片上,应用Protein Chip Software 3.1和Biomarker Wizard(BMW)软件,根据方差分析原理计算CHIPC治疗恶性腹水前后患者血清相同质荷比的蛋白质峰值表达差异的P值。根据P值的大小可比较每一个质荷比峰在两样本中表达差异的显著性程度,P值越小说明该质荷比峰对区分两类样本越有意义。1)血清中,灌注前/灌注后波峰强度之间的比较采用t检验,P<0.05为差别有统计学意义。2)腹水中,灌注前/灌注后波峰强度之间的比较采用t检验,P<0.05为差别有统计学意义。3)根据检测得到两组均高表达差异蛋白,通过匹兹堡大学生物医学信息学系已建立蛋白质组学实验数据库(EPO-KB),可直接根据m/z完成对差异蛋白质的检索。从而分析相关目标蛋白在CHPPC治疗恶性腹水中的意义。结果:1) SELDI-TOF-MS检测共发现血清中有效蛋白峰83个;SELDI-TOF-MS检测共发现腹水中有效蛋白峰74个。2) SELDI-TOF-MS检测发现的血清中和腹水中的有效蛋白峰有一定的重叠性。3) CHIPC治疗恶性腹水患者血清中,灌注前8例对灌注后8例,共发现P<0.05的差异蛋白22个。4) CHIPC治疗恶性腹水患者腹水中,灌注前8例对灌注后8例,共发现P<0.05差异蛋白20个。5)血清中和腹水中,灌注前/灌注后差异表达的蛋白质谱有以下差异蛋白在两组中均出现高表达,质/荷(m/z)值分别为:5582.36Da,3448.56Da,4418.04Da,7767.61Da,11661.53Da,3378.49Da和8604.72Da。6)在蛋白质组学实验数据库(EPO-KB)检索上述分子量的差异蛋白,检测出m/z值为7767.61Da的目标蛋白与血小板因子4(PF4)相吻合,其余6个差异蛋白则未能检索到与之吻合的目标蛋白。结论:1)与治疗前相比,CHIPC治疗后,恶性腹水患者的血清和腹水中相关的蛋白质表达水平均有显著性的变化。2)与治疗前相比,CHIPC治疗后,血清和腹水中部分差异蛋白峰的具有高度重复性。3)统计学分析表明:CHIPC治疗后血清中和腹水中中m/z值为5582.36Da、3448.56Da、4418.04Da、7767.61Da、11661.53Da、3378.49Da和8604.72Da的7个蛋白峰均有高表达。4)通过检索得到m/z值为7767.61Da的目标蛋白与血小板因子4(PF4)相吻合,其余6个差异蛋白则未能检索到与之吻合的目标蛋白。

全文目录


缩略词表  4-6
中文摘要  6-9
ABSTRACT  9-12
前言  12-18
  一、恶性腹水的临床诊治研究现状  12-13
  二、腹腔热灌注化疗治疗恶性腹水的临床应用现状  13
  三、蛋白质组学技术在肿瘤学研究领域的应用前景  13-16
  四、本研究的目的  16-18
材料与方法  18-24
  1. 实验对象选择条件  18-19
  2. 主要试剂和耗材  19
  3. 试剂配制  19-20
  4. 主要仪器  20
  5.芯片选择  20-21
  6. 血清和腹水标本收集  21
  7. 血清和腹水样品准备  21
  8. 弱阳离子芯片 WCX2 芯片准备  21-22
  9.SELDI-TOF-MS 操作规程  22
  10.芯片阅读主要参数设定  22-23
  11. 数据采集和分析  23
  12. SELDI-TOF-MS 技术检测 CHIPC 治疗胃癌并恶性腹水的技术路线  23-24
结果  24-31
讨论  31-34
结论  34-35
参考文献  35-39
附图  39-41
综述  41-48
  参考文献  45-48
附表  48-50
致谢  50-51

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 一般性问题 > 肿瘤治疗学
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