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免疫球蛋白重链结合蛋白在人骨肉瘤细胞中的表达及临床意义

作　者: 李天强
导　师: 徐展望
学　校: 山东中医药大学
专　业: 中医骨伤科学
关键词: 骨肉瘤免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip) 免疫细胞化学染色免疫组织化学染色 RT-PCR
分类号: R738.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：应用不同的实验方法来检测免疫球蛋白重链结合蛋白（Bip）在人骨肉瘤细胞株Saos₂细胞中的表达,并进一步研究其在临床20例骨肉瘤标本及其周围正常组织中的表达；并比较骨肉瘤组织及正常组织表达的差异；术前化疗与术前未化疗标本表达的差异；远隔转移及未转移标本之间的表达差异。并依此来推断这Bip在骨肉瘤组织中的表达与骨肉瘤生长、转移的关系以及化疗对其表达的影响,以期能为骨肉瘤治疗和预后评估提供实验和理论依据。方法：1取人骨肉瘤细胞株Saos₂细胞进行免疫荧光染色。以空白组作为对照。用荧光显微镜观察是否有Bip蛋白质表达。2取人骨肉瘤细胞株Saos₂细胞抽提细胞总RNA,然后用RT-PCR试剂盒进行PCR反应。检测是否有BipmRNA的表达。3取临床骨肉瘤及其周围正常组织标本各20例,骨肉瘤标本中未转移者6例,转移者14例；术前化疗者12例,术前未化疗者8例。做石蜡切片进行免疫荧光染色。检测Bip表达强度。结果：1 Bip在人骨肉瘤细胞株Saos₂细胞中有表达,主要存在于细胞内质网膜上,细胞胞浆被染为绿色为阳性。染色深时为全胞浆绿色,浅时为类泡样胞浆绿染。2BipmRNA在人骨肉瘤细胞株Saos 2细胞中有表达。3所有标本中都有Bip的表达。Bip的表达强度为肿瘤组织>正常组织,肿瘤转移组>未转移组,术前未化疗组>术前化疗组。肿瘤转移组和未转移组,术前未化疗组和术前化疗组表达量有显著差异。结论：本研究表明,Bip可刺激肿瘤增殖,存活,转移,并且对化疗药物治疗有相应的反应。因此,Bip可作为骨肉瘤生长转移和治疗反应的分子靶向标记,在临床工作中也可应用Bip作为判断骨肉瘤发展和预后的生物标记。而应用基因手段下调Bip的表达可能抑制骨肉瘤细胞的生长、增加骨肉瘤细胞对化疗药物的敏感性,控制其转移并改善预后。抑制Bip表达的联合治疗可能代表根除残留骨肉瘤的新方法。因此,利用Bip作为分子靶点或介质进行骨肉瘤基因治疗具有广泛的应用前景。

全文目录

提要  3-4
Abstract  4-8
引言  8-11
材料和方法  11-22
  1 实验材料  11-15
    1.1 细胞株和标本  11
      1.1.1 细胞株  11
      1.1.2 标本  11
    1.2 主要试剂材料  11-12
    1.3 主要试剂的配制  12-15
  2 主要仪器设备  15-16
  3 实验方法  16-22
    3.1 细胞培养  16-17
    3.2 细胞爬片  17
    3.3 细胞收集  17
    3.4 免疫细胞化学  17-18
    3.5 RT-PCR  18-20
    3.6 免疫组织化学  20-22
    3.7 数据分析  22
实验结果  22-24
  1 免疫细胞化学荧光染色检测BIP表达结果  22
  2 RT-PCR法检测BIP表达结果  22
  3 免疫组织化学荧光染色检测BIP表达结果  22-24
讨论  24-28
  1 骨肉瘤治疗的发展及缺陷  24
  2 BIP的结构及功能  24-25
  3 BIP在肿瘤中的诱导与肿瘤生长、转移、耐药的关系  25-26
  4 BIP在肿瘤治疗中的应用前景  26-28
结语  28-29
参考文献  29-34
附录  34-39
  1 附图  34-37
  2 符号说明  37-39
综述  39-47
  参考文献  43-47
致谢  47-48
论文著作  48-53
详细摘要  53-57

免疫球蛋白重链结合蛋白在人骨肉瘤细胞中的表达及临床意义

内容摘要

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