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斑点热群立克次体海南株的分离和鉴定

作　者: 林英姿
导　师: 刘志刚
学　校: 江西医学院
专　业: 病原生物学
关键词: 斑点热群立克次体 mlFA 细胞分离培养多聚酶链反应鉴定
分类号: R376
类　型: 硕士论文
年　份: 2001年
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内容摘要

斑点热群立克次体（spotted fever group Rickttsia，SFGR）系引起斑点热的病原体，是立克次体属中最复杂的一群。《Bergey’s细菌学鉴定手册》第九版上收录了8种斑点热群立克次体，其中有5种对人具有致病性。该立克次体与节肢动物关系密切，世界各地都有发生。近年来，由于人们社会活动的增加、全球化贸易活动的进行、旅游业的发展等，导致斑点热发病率上升、新的病原体出现，原有疾病的情况及分布也发生了变化。世界各地又陆续分离到10余种致病或不致病的SFGR，它们都被认为是斑点热群新种，其中包括我国分离的黑龙江立克次体及内蒙古立克次体。我国自1962年从黑龙江东方田鼠分离到第一株斑点热群立克次体（虎林84）以来，已经从不同地区的媒介蜱和啮齿动物以及斑点热患者中分离到多株斑点热群立克次体，但多在北方地区，故一直以来人们认为南方没有斑点热。1986年日本内田孝宏在日本四国地区分离出一株日本斑点热立克次体，为斑点热群立克次体的一个新种，而海南岛的自然景观与四国相似，其生态环境都非常有利于媒介昆虫的繁殖，是否也有日本斑点热立克次体（R.japonica）或其他立克次体感染的存在？为探明海南岛立克次体，尤其是斑点热立克次体的感染情况，我们于1990年及1993年分别在海南岛各地采样开展立克次体血清学和病原学的调查研究。1990年自海南岛东南部（保亭县）、中南部（通什市）和北部（海口市）采取了 642份当地医院诊断为非立克次体病的患者血清及 37份疑似立克次体感染的患者血清，应用微量间接免疫荧光法帅 FA）进行了人群血清日本斑点热门．japonica人鼠型斑疹伤寒立克次体皈．tyPhi）抗体调查。调查结果，只有2份血清含有高滴度日本立克次体抗体（滴度 31：160人提示海南岛日本斑点热立克次体感染罕见。但是，从海南岛东南部和中南部地区（五指山周边区）的血清学调查结果发现，在斑疹伤寒 IgG抗体阳性的人群血清中，40％有斑疹伤寒立克次体 lgM抗体（滴度 31：80人在当地疑似立克次体感染的患者血清中，约半数含有高滴度斑疹伤寒立克次体 IgMI gG抗体（滴度均＞ 1：16 0人表明在门诊患者中有漏诊的斑疹伤寒现症病人或新近感染过斑疹伤寒的患者，在疑似克次伸感染的患者中斑疹伤寒的感染相当严重。基于以上情况，我们又于1993年自海南岛的东、南、西、北、中部选点采集了561份各医院诊断为非立克次体病的患者血清标本，应用mIM进行了斑点热、流行性斑疹伤寒和恙虫病立克次体抗体调查。调查结果，血清 IgG 抗体的阳性率分别为：斑点热立克次体30．830（164／532），流行性斑疹伤寒立克次体 18．770（101／538），恙虫病立克次体13．55叭76巧61入结果表明海南岛有多种立克次体病（斑点热、斑疹伤寒、恙虫病）存在，其地理分布较广，主要在山区和丘陵地带（琼中县、大丰农场、循州市、通什市、保亭县等五指山周边区人平原和滨海城市（海口市、三亚市）较少。本调查首次发现海南岛有斑点热感染存在，修正了过去认为我国南方没有斑点热的观点。斑点热群立克次体如同其他立克次体一样，是专性话细胞内寄生的微生物，通常人们用动物（豚鼠）和鸡胚进行立克次体的分离及传代培养，且标本多来自媒介昆虫或动物。我们根据国外的相关报道，采用L929（鼠纤维母细胞株）和V盯。H洲绿猴肾上皮细胞株）单层细胞培养法直接从患者血液中分离立克次体，这在国内尚属首次。30份疑似立克次体病或不明热患者全血或血块标本中，先后共分离出 19株立克次体，经 ml FA、多聚酶链反应uCR）鉴定 11株是斑点热群立克次体，4株是斑疹伤寒立克次体，4株是恙虫病立克次体。 PCR由于能在体外将特异性DNA序列进行高效扩增，为病原体的分型 2提供了有力手段，目前已成为新的分类鉴定和诊断SFGR的方法。因PCR法非常敏感，标本中有2个个立克次体即可检出，故可用于SFGR的快速、早期诊断。分于量为190kD蛋白基因是斑点热群立克次体特有的基因＊年，Regnery首次根据立氏立克次体分子量为190kD蛋臼基因b呷A）设计的 Rr190．70p不 Rrl90＊02n一对引物用于扩增 SFGR o呷A的 ORF起始部位 532 hp大小的基因片段，继之用限制性内切酶长度多肽性图谱法oCR／RFLP）区别SFGR。由于该法具有快速。简便、特异等优点，目前已被广泛用于SFGR新种的鉴定。我们对20例疑似立克次体感染或不明热患者的血液标本经 L929细胞分离培养，共分离出 12株立克次体，将这 12株立克次体的分离培养物用 Rr190．70p和 Rr190．602n这一对引物进行 PCR检测，结果检出 7株为斑点热群立克次体。对 10例疑似立克次体感染或不明热患者的血液标本先用立克次体属（恙虫病立克次体除外）PCR引物对RpCS877p。RpCS1258n检坝，结果7例卜性。将这7例阳性血液标本接种Vero细胞分离培养，均分离出立克次体。这7株立克次体?

全文目录

一、中文摘要  3-6
二、英文摘要  6-10
三、前言  10-15
四、材料与方法  15-22
五、结果  22-34
六、讨论  34-37
七、小结  37-38
八、致谢  38-39
九、参考文献  39-44
十、个人简历  44-46
十一、综述  46-57

斑点热群立克次体海南株的分离和鉴定

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