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苏云金芽孢杆菌高效菌株的选育、发酵培养与添加剂筛选

作　者: 邱思鑫
导　师: 关雄
学　校: 福建农林大学
专　业: 植物病理学
关键词: 苏云金芽孢杆菌 质粒消除 培养基优化 添加剂 增效作用
分类号: S476.11
类　型: 硕士论文
年　份: 2001年
下　载: 271次
引　用: 2次
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内容摘要


本论文是针对目前我国南方主要蔬菜害虫小菜蛾、甜菜夜蛾、斜纹夜蛾等的生物防治问题而进行的研究。 利用42℃高温及其与SDS复合消除质粒法处理本室分离保存的8010、WB2、WB3、WB6 4菌株，利用小菜蛾对突变株进行生测筛选，获得一高毒力菌株TS16，其小于2Kb的质粒带丢失，6.6Kb的质粒带明显变淡，毒力比原菌株提高50％左右。并以TS16为目标菌株，对其进行了培养基优化和添加剂筛选。 室内摇瓶培养基的筛选表明，其发酵产孢量主要受葡萄糖、蛋白胨影响，酵母膏与无机盐影响较小。但就无机盐而言，以FeSO4.7H2O与KH2PO4对产孢数影响较大。以葡萄糖为碳源（x1）、蛋白胨和酵母膏（x2）为氮源，进行二因素旋转正交试验，以产孢数为响应值，进行回归方程拟合，拟合的结果为： y=155.200＋13.380x1+22.866x2-24.097x12-22.682x22＋17.575x1x2从中获得最佳培养基组合为碳源17.68g/L、氮源14.85g/L、无机盐为1.34g/L。 以农副产品为主的高毒力发酵培养基的筛选结果表明，不同原料对毒力影响很大，在几种培养基组分中以鱼粉和花生饼粉对发酵液的毒力影响较大，而淀粉对发酵液的毒力没有明显的影响。试验所得的最佳组合培养基为：黄豆饼粉32g/L、玉米粉14g/L、花生饼粉32g/L、鱼粉14g/L、蛋白胨4g/L、酵母膏6g/L、FeSO4.7H2O 0.04g/L和ZnSO47H2O 0.08g/L。 发酵条件对Bt发酵结果的影响表明，通气量、温度、pH值都影响发酵产孢数和毒力。在以葡萄糖和蛋白胨为主的高产孢培养基中，以消前pH 7.2左右较好，而在以农副产品为主的培养基中，以消前pH值8.5左右发酵液毒力最大。至于温度以25～30℃为宜，而通气需要量较大，均以所设摇瓶装量中最少的最佳。 从82种添加剂中筛选出14种有较好增效作用的物质进行不同浓度对Bt杀虫效果影响和较佳浓度下的增效倍数测定表明，各添加剂的浓度对Bt杀虫效果影响差异显著，在1％的剂量以下多数添加剂的增效作用随剂量的增加而增强，添加剂2号、K2CO3、硼酸3种物质的增效作用明显，增效倍数分别达2.7743、2.0900、2.7817倍，Ca（Ac）2、NaAc、FeSO4等9种物质的增效倍数达0.4378～1.9723倍。

全文目录


中文摘要  6-7
英文摘要  7-9
1 前言  9-23
  1．1 筛选、培育高效菌株  10-11
  1．2 取食刺激剂的增效作用  11-12
  1．3 Bt与化学杀虫剂的混用  12-13
  1．4 Bt与其他天敌生物及其代谢产物联合使用  13
  1．5 植物次生物质的增效作用  13-14
  1．6 化学添加剂的增效作用  14-16
  1．7 保护Bt免受紫外光的损伤  16
  1．8 Bt制剂剂型加工技术的改进  16-17
  1．9 发酵培养基优化及发酵条件的优选  17-21
  1．10 问题与展望  21-23
2 材料与方法  23-31
  2．1 Bt质粒消除  23
  2．2 质粒的提取和检测  23-24
    2．2．1 质粒DNA的提取  23-24
    2．2．2 电泳检测  24
  2．3 菌株的生测筛选及复壮  24-26
    2．3．1 供试小菜蛾  24-25
    2．3．2 其他供试虫源  25
    2．3．3 质粒消除株的生测筛选  25-26
    2．3．4 菌株的复壮及毒力测定  26
  2．4 高发酵菌数摇瓶培养基筛选  26-28
    2．4．1 初筛培养基  26
    2．4．2 摇瓶发酵与计数  26
    2．4．3 培养基初筛  26
    2．4．4 培养基优化  26-27
    2．4．5 发酵条件对产孢数的影响  27-28
  2．5 基于工业原料的高杀虫效果培养基筛选  28-29
    2．5．1 原料  28
    2．5．2 培养基组合初步筛选  28
    2．5．3 培养基组分调整试验  28
    2．5．4 无机盐对毒力的影响试验  28-29
    2．5．5 发酵条件对毒力的影响  29
    2．5．6 摇瓶试验  29
  2．6 化学添加剂筛选  29-30
    2．6．1 添加剂种类  29-30
    2．6．2 发酵液制备  30
    2．6．3 筛选方法  30
  2．7 田间小区试验  30-31
3 结果与分析  31-52
  3．1 消除株的获得  31
  3．2 质粒消除株的初步生物测定  31-33
  3．3 复壮后菌株的生物测定  33-35
    3．3．1 复壮菌株对小菜蛾的毒力  33-34
    3．3．2 复壮菌株对夜蛾的毒力  34-35
  3．4 高发酵菌数摇瓶培养基的筛选与发酵条件优化  35-39
    3．4．1 高发酵菌数培养基筛选  35-38
    3．4．2 发酵条件对菌数的影响  38-39
  3．5 基于工业原料的高杀虫效果培养基筛选  39-44
    3．5．1 培养基组合初步筛选  39-41
    3．5．2 培养基组分调整试验  41-43
    3．5．3 无机盐对毒力的影响  43
    3．5．4 发酵条件对毒力的影响  43-44
  3．6 添加剂对Bt杀虫效果的影响  44-50
    3．6．1 不同种类添加剂对Bt杀虫效果的影响  44-47
    3．6．2 不同质量浓度的添加剂对Bt杀虫效果的影响  47-49
    3．6．3 添加剂对Bt增效效果的测定  49-50
  3．7 田间试验  50-52
4 小结与讨论  52-57
参考文献  57-64
附录 1  64-66
附录 2  66-67
致谢  67

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中图分类: > 农业科学 > 植物保护 > 各种防治方法 > 生物防治 > 微生物病源的利用 > 昆虫细菌
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