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强阴离子交换毛细管电色谱和毛细管金属螯合酶反应器

作　者: 雷政登
导　师: 邹汉法
学　校: 中国科学院大连化学物理研究所
专　业: 分析化学
关键词: 毛细管电色谱 强阴离子交换 固定化酶 金属螯合 微反应 器 MALDI-TOF-MS 肽谱分析
分类号: O658.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2001年
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内容摘要


毛细管电色谱是新近发展起来的一种高效的微分离技术，它结合了毛细管电泳电渗流驱动的高效性与高效液相色谱溶质分离的高选择性，成为九十年代以后分离科学的研究热点。 本文对酸性样品在强阴离子交换毛细管电色谱中的保留行为进行了研究。考察了样品在固定相上的吸附、电压、电解质离子浓度对保留的影响。并对样品在强阴离子交换毛细管电色谱和毛细管区带电泳的不同的保留行为进行了讨论。 以石英毛细管作为载体，制备了一种金属螯合型酶解微反应器，适用于微量蛋白质样品的酶解，与MALDI-TOF-MS联用可以得到蛋白质的肽谱信息，将所得到的肽质谱图用于蛋白质数据库检索，可以确定各肽段在蛋白质中的位置。 在制备金属螫合型酶解微反应器过程中，针对毛细管作为载体的特点，摸索出了一条比较好的合成路径。对反应器的一些性质进行了考察。该反应器体积小，可用于蛋白质的痕量分析，并且易于保存和再生。

全文目录


第一章 毛细管电色谱简介  8-18
  第一节 毛细管电色谱的发展简史  8-9
  第二节 毛细管电色谱的基本理论  9-15
    2．1 双电层  9-10
    2．2 电渗流  10-11
    2．3 电泳  11-12
    2．4 焦耳热效应  12-13
    2．5 区带展宽  13-14
    2．6 保留机理  14-15
  第三节 柱制备技术  15-18
    参考文献  16-18
第二章 强阴离子交换电色谱  18-30
  第一节 引言  18
  第二节 实验部分  18-19
    2．1 仪器和试剂  18-19
    2．2 柱制备  19
  第三节 结果和讨论  19-30
    3．1 吸附对保留的影响  19-22
    3．2 电压对保留的影响  22-25
    3．3 电解质离子浓度对保留的影响  25-26
    3．4 SAX-CEC与CZE的选择性比较  26-28
    参考文献  28-30
第三章 固定化酶在肽谱分析中的应用  30-43
  第一节 酶的固定化  30-36
    1．1 酶的固定化方法  30-34
      1．1．1 吸附法  31-32
      1．1．2 共价键结合  32
      1．1．3 交联法  32-33
      1．1．4 包埋法  33
      1．1．5 各种固定化方法的优缺点  33-34
    1．2 固定化酶的性质  34-36
      1．2．1 酶的活力  34-35
      1．2．2 酶的稳定性  35
      1．2．3 酶的特征  35-36
  第二节 蛋白质肽谱分析  36-43
    2．1 蛋白质肽谱分析的意义  36-38
    2．2 蛋白质肽谱分析的方法  38-39
      2．2．1 SDS-PAGE肽谱分析  38
      2．2．2 HPLC和CE肽谱分析  38-39
      2．2．3 MS肽谱分析  39
    2．3 固定化酶解微反应器用于肽谱分析  39-40
    参考文献  40-43
第四章 毛细管金属螯合固定化酶反应器的的制备和应用  43-59
  第一节 引言  43
  第二节 实验部分  43-50
    2．1 仪器和试剂  43-44
    2．2 毛细管金属螯合固定化酶反应器的制备  44-49
      2．2．1 合成方法的选择  44-47
      2．2．2 毛细管的粗糙化  47-48
      2．2．3 GLYMO-IDA-SIL ANE的合成  48
      2．2．4 毛细管的硅烷化反应  48-49
      2．2．5 胰蛋白酶的固定化  49
    2．3 毛细管金属螯合固定化酶反应器用于蛋白质肽谱研究  49-50
      2．3．1 毛细管微反应器酶解马心细胞色素C  49
      2．3．2 MALDI质谱测定  49-50
  第三节 结果与讨论  50-59
    3．1 IDA-Cu与酶的螯合物结构  50-51
    3．2 毛细管微反应器的特点  51
    3．3 基体及样品制备方法对测定结果的影响  51
    3．4 酶解时间对测定结果的影响  51-54
    3．5 蛋白质样品用量对测定结果的影响  54
    3．6 酶解微反应器的再生  54-58
    3．7 牛血清蛋白的肽谱分析  58-59
参考文献  59-61
附页 若干研究工作设想  61
1． 研制可再生的蛋白质手性柱  61-62
2． 半导体热电效应应用于电泳仪的改制  62-65
发表论文  65-66
致谢  66

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中图分类: > 数理科学和化学 > 化学 > 分析化学 > 元素及化合物的分离方法 > 其他
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