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斑马鱼雌核发育诱导及早期胚胎发育研究

作　者: 陈宝增
导　师: 康现江
学　校: 河北大学
专　业: 水生生物学
关键词: 雌核发育单倍体二倍体胚胎发育同工酶
分类号: S917.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 51次
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内容摘要

本研究利用斑马鱼(Danio rerio)进行了人工诱导雌核发育(artificially induced gynogenesis)以及早期胚胎发育的研究,旨在通过本实验探讨研究人工诱导雌核发育的基本原理,为人工诱导雌核发育技术的推广提供理论依据。研究结果如下：1.人工诱导雌核发育首要的一步是进行雄核灭活,为筛选有效的斑马鱼雄核灭活条件,将斑马鱼的精子分别置于纯水(A)、Cortland鱼用生理盐水(B)、M199培养基(C)、Hank’s液(D)以及Ringer氏溶液(E)中进行不同时间的紫外线照射,结果各组均得到畸形鱼苗,且畸形鱼苗的体型特征符合“单倍体综合症”(haploid syndrome)所描述的现象。五种介质中在Cortland鱼用生理盐水中平均受精率最高,依次为：Cortland鱼用生理盐水(B)>Hank’s液(D)>Ringer氏溶液(E)>M199培养基(C)>纯水(A),35 s辐射比较适于斑马鱼精子灭活与激活卵的发育。2.人工诱导雌核发育的另一个关键步骤是染色体加倍。本文通过热休克方法进行染色体加倍,旨在找到合适的加倍时间。用筛选出的最适雄核灭活条件对斑马鱼精子悬液进行灭活,然后干法挤出斑马鱼的卵子,人工受精,在41.5±0.5℃条件下,进行热休克处理2 min,结果显示,在受精后15 min和27 min二倍体生成率较高,15 min时出现最高诱导率,为66.67%。3.通过胚胎发育过程的显微拍摄,比较了雌核发育单倍体、正常发育二倍体和人工诱导雌核发育胚胎的差异,结果表明,三种胚胎发育速度差异明显；另外形态学上差异也很明显,普通二倍体胚胎与人工诱导雌核发育二倍体胚胎在外观上差异不明显,胚胎发育正常,发育时序基本相同,只是人工诱导雌核发育二倍体胚胎活力较小。普通二倍体胚胎与单倍体胚胎外部形态差异明显,单倍体鱼苗具有典型的“单倍体综合症”。4.运用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,分析了斑马鱼人工诱导雌核发育子代、雌性亲本、雄性亲本鳍、眼、肌肉、鳃、性腺五种组织中EST、LDH、SCD、MDH四种同工酶的酶谱。研究结果表明雌核发育子代与雌性亲本间的EST、LDH、SOD、MDH同工酶谱表达是基本一致的,仅仅在酶的表达量上稍微有些差异。但是雌核发育子代、雌性亲本与雄性亲本同工酶的差异比较明显,不仅表现为酶的活性上的差异,在同工酶的迁移率、酶带的数量上也有较大差异,但是这种差异在不同的组织中表现不同,部分组织中与雌核发育子代、雌性亲本并无差异。5.通过跟踪比较,刚孵化时,雌核发育仔鱼的体重低于正常仔鱼,30天至90天之间,没有明显差异,90天之后,差异明显,雌核发育后代体重明显高于正常后代。实验中共获得29尾雌核发育子代,其中27尾为明显雌性,另外2尾从外部形态上无法区分雌雄。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-12
第一章引言  12-20
  1.1 鱼类性别控制研究进展  12-13
    1.1.1 鱼类性别控制的意义  12
    1.1.2 鱼类的性染色体类型  12
    1.1.3 鱼类性别控制方法  12-13
  1.2 人工诱导雌核发育研究进展  13-20
第二章斑马鱼精子紫外线辐射灭活的初步研究  20-26
  2.1 材料和方法  20-21
    2.1.1 材料  20
    2.1.2 方法  20-21
  2.2 结果  21-24
    2.2.1 紫外线照射时间与受精率、孵化率、畸形率的关系  21-24
    2.2.2 畸形鱼苗的染色体  24
  2.3 讨论  24-26
第三章热休克法诱导斑马鱼二倍体产生  26-30
  3.1 材料和方法  26
    3.1.1 实验材料的选择  26
    3.1.2 精卵的获得  26
    3.1.3 数据处理与雌核发育鱼的鉴定  26
  3.2 结果  26-29
  3.3 讨论  29-30
第四章斑马鱼普通二倍体、人工诱导雌核发育二倍体、雌核发育单倍体胚胎发育比较  30-37
  4.1 材料与方法  30
    4.1.1 实验材料  30
    4.1.2 斑马鱼普通二倍体、单倍体、雌核发育二倍体胚胎的获得  30
    4.1.3 胚胎发育过程的观察与记录  30
  4.2 结果  30-32
    4.2.1 斑马鱼普通二倍体胚胎的发育过程  30-32
    4.2.2 斑马鱼单倍体胚胎发育过程  32
    4.2.3 斑马鱼雌核发育二倍体胚胎发育过程  32
  4.3 讨论  32-37
第五章人工诱导斑马鱼雌核发育个体与其双亲同工酶比较研究  37-42
  5.1 材料与方法  37-38
    5.1.1 材料  37
    5.1.2 试剂  37
    5.1.3 仪器设备  37
    5.1.4 方法  37-38
  5.2 结果  38-40
    5.2.1 EST电泳结果  38-39
    5.2.2 LDH电泳结果  39
    5.2.3 SOD电泳结果  39-40
    5.2.4 MDH电泳结果  40
  5.3 讨论  40-42
第六章斑马鱼雌核发育后代的生长  42-44
  6.1 材料和方法  42
    6.1.1 人工诱导雌核发育斑马鱼的养殖条件  42
    6.1.2 雌核发育斑马鱼的生长  42
    6.1.3 雌核发育斑马鱼的性别比例  42
  6.2 结果  42-43
    6.2.1 雌核发育斑马鱼的生长  42-43
    6.2.2 斑马鱼雌核发育后代的性别比例  43
  6.3 讨论  43-44
结语  44-45
参考文献  45-52
致谢  52-53
附录  53

斑马鱼雌核发育诱导及早期胚胎发育研究

内容摘要

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