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鸭梨采后多酚氧化酶（PPO）同工酶及基因与果实褐变关系的研究

作　者: 何利华
导　师: 江英；闫师杰
学　校: 石河子大学
专　业: 农产品加工及贮藏工程
关键词: PPO 同工酶基因 RT—PCR
分类号: S661.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

鸭梨(Pyrus bretschneideri Rehd cv.Yali)为我国传统优良主栽品种,采后贮藏中主要问题是果心褐变。国内外对此做了许多研究,大多数学者认为PPO酶是引起果实褐变的主要因素之一。而目前对鸭梨PPO的研究大多侧重于其活性和酚类物质含量的关系。对其发生机制未进行深入研究,使鸭梨褐变的研究不能取得有效进展。因此,从分子角度研究PPO和鸭梨褐变的关系对揭示鸭梨褐变具有重要的意义。本实验以早、中、晚三种不同采摘期的鸭梨为材料,研究了缓慢降温和急速降温中PPO活性和果实褐变的关系,并采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法研究研究急速和缓慢两种降温方法对早、中、晚三种采收成熟度鸭梨采后果肉、果心和种子中的PPO同工酶的变化规律。其次采用了半定量RT—PCR扩增方法研究急速和缓慢两种降温方法对早、中、晚三种采收成熟度鸭梨采后果肉和果心中的PPO基因的变化规律与果实衰老、褐变的关系。结论如下：1。缓慢降温的PPO活性比相同成熟度的急速降温的活性低,这与果心的褐变指数变化趋势相一致,这说明PPO与鸭梨褐变有密切关系。并表明缓慢降温能有效抑制鸭梨褐变。同时,早采鸭梨的PPO活性最高,晚采次之,中采最低。说明不同的成熟度也是影响鸭梨褐变的因素。2.通过对果肉、果心及种子的PPO同工酶图谱变化趋势与PPO活性变化的研究,发现在果肉中,影响PPO活性的同工酶为A、B两区间的同工酶；在果心中,影响PPO活性的同工酶为A、B两区间的同工酶；在种子中,影响中采鸭梨PPO活性的同工酶为C、D区间的同工酶,影响早采和晚采采鸭梨PPO活性的同工酶为C、D、F区间的同工酶。3.通过GenBank中的梨的基因设计并确定了引物P(5’一CAT AT GACGT CTCTT TCACC TCCGG TAGTC—3’ 5’-CGGGA TCCTT AAGAA GCAAA CTCAA TCTTG ATAC-3’)得到的RT—PCR产物(1780bp)其鸭梨的同源性为99%,它只有在果心中表达。Q(5’—GCT TCAAGC AACAGG CAG CCGT G—3’5’—CGT TGA CAC ATT GTC CTC GGT CC—3)得到的RT—PCR产物(315bp)其鸭梨的同源性为97%,能在果肉和果心中表达。Actin基因也得到确定,引物为(5’—CAG TGG TCG TAC AAC TGG TAT—3’5’-AGG TAG CTC ATA GCT CTT CTC- 3’)。为而为利用PPO基因研究鸭梨褐变提供了理论依据。4.通过研究基因Q和P与PPO活性的关系,得出P是影响PPO活性的一个关键的基因,Q与PPO活性也有密切的关系。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-9
第一章文献综述  9-16
  1.1 鸭梨生产目前存在的现状  9-10
  1.2 鸭梨采后果实褐变机理的研究进展  10-12
  1.3 PPO 同工酶与鸭梨褐变关系的研究进展  12-13
    1.3.1 PPO的同工酶及相关研究进展  12
    1.3.2 PPO的同工酶的分离方法的研究  12-13
  1.4 PPO基因的差异表达与鸭梨褐变的研究进展  13-15
    1.4.1 PPO基因及相关研究进展  13-14
    1.4.2 PPO基因的表达方法的研究  14-15
  1.5 研究的目的意义及主要内容  15-16
    1.5.1 研究的目的意义  15
    1.5.2 研究的主要内容  15-16
第二章不同处理不同成熟度的鸭梨的褐变情况及PPO酶活性的变化规律  16-26
  2.1 材料与方法  16-17
    2.1.1 实验材料  16
    2.1.2 仪器与药品  16-17
    2.1.3 实验方法  17
  2.2 数据统计及处理分析  17-18
  2.3 结果与分析  18-25
    2.3.1 不同降温方法对不同成熟度鸭梨采后果实褐变指数的影响  18-21
    2.3.2 不同降温方法对不同成熟度鸭梨采后PPO活性的影响  21-25
  2.4 小结  25-26
第三章不同处理不同成熟度鸭梨PPO同工酶的谱带变化规律  26-37
  3.1 材料与方法  26-27
    3.1.1 实验材料  26
    3.1.2 仪器与药品  26-27
    3.1.3 实验方法  27
  3.2 数据统计与处理  27-28
  3.3 结果与分析  28-36
    3.3.1 不同降温方法和不同成熟度鸭梨的PPO同工酶谱带  28-30
    3.3.2 不同降温方法对不同成熟度鸭梨采后果心多酚氧化酶同工酶的影响  30-32
    3.3.3 不同降温方法对不同成熟度鸭梨采后果肉PPO同工酶的影响  32-33
    3.3.4 不同降温方法对不同成熟度鸭梨采后种子多酚氧化酶同工酶的影响  33-35
    3.3.5 不同降温方法对不同成熟度鸭梨PPO活性与同工酶的关系  35-36
  3.4 小结  36-37
第四章不同处理不同成熟度鸭梨PPO相关基因的表达规律  37-49
  4.1 材料与方法  37-40
    4.1.1 实验材料  37
    4.1.2 仪器与药品  37-38
    4.1.3 实验方法  38-40
  4.2 数据统计及分析  40
  4.3 结果与分析  40-47
    4.3.1 鸭梨相关基因的RT-PCR扩增  40-47
    4.3.2 不同降温方法对不同成熟度鸭梨果心PPO活性与相关基因的关系  47
  4.4 小结  47-49
第五章结论与展望  49-51
  5.1 结论  49
  5.2 创新点  49
  5.3 展望  49-51
6. 参考文献  51-54
致谢  54-55
作者简介  55-56
石河子大学硕士研究生学位论文  56

鸭梨采后多酚氧化酶（PPO）同工酶及基因与果实褐变关系的研究

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