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中药抗真菌活性测定和酵母利用非发酵碳源基因的筛选

作　者: 赵炯
导　师: 蒋伶活
学　校: 天津大学
专　业: 药物化学
关键词: 纸片法 中药醇提物 白念珠菌 抗真菌活性 酿酒酵母 非发酵碳源 基因缺失株筛选
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要


课题一:目的:确定干纸片法和湿纸片法的可靠性,用以筛选有抗真菌活性的中药。方法:以人体上最重要的致病真菌白念珠菌(Candida albicans)作为生物模型,用干纸片法和湿纸片法测量中药粗提物和植物精油的抗白念珠菌活性。方法上干纸片法和湿纸片法都较好地满足了公式Z2 = A logQ - M,即抑菌圈直径的平方和纸片含药量的对数成正比,且干纸片法和湿纸片法之间没有显著性差异。然后,我们用干纸片法和湿纸片法测定了27种中药的醇提物和29种植物芳香油提取物的抗白念珠菌的活性,结果显示雪茶、重楼和肉桂油有较明显抑菌作用。结论:湿纸片法未见报道,针对中药粗提物的复杂溶解特性,湿纸片法只要方法得当,可以作为干纸片法的补充,为筛选有活性的中药提供更多证据。课题二:目的:筛选酿酒酵母利用非发酵碳源相关的基因。方法:先用384针影印板影印酿酒酵母基因缺失株文库在以葡萄糖、乙醇和甘油为碳源的YPD、YPE和YPG培养基上,比较基因缺失菌株在完全培养基YPD和非发酵碳源培养基YPE和YPG上生长情况,找出在非发酵碳源培养基上生长有缺陷的菌株,然后把这些菌株用浓度梯度稀释法进一步验证它们利用非发酵碳源的缺陷,从而确定不能利用非发酵碳源的基因缺失菌株。结果:172株是在YPE和YPG培养基上都表现生长缺陷的,16株是在YPE上生长良好而在YPG上生长有缺陷的,35株是在YPG上生长良好而在YPE上生长有缺陷的。结论:这些基因功能的发现,为研究酿酒酵母碳源代谢,阐明酿酒酵母中非发酵碳源利用相关代谢机制提供重要信息。

全文目录


中文摘要  2-3
Abstract  3-6
第一部分 中药粗提物抗真菌活性测定  6-30
  第一章 文献综述  6-12
    1.1 真菌病及抗真菌药物  6-10
      1.1.1 真菌病  6-7
      1.1.2 抗真菌药物的研究进展  7-10
    1.2 中药抗真菌活性的测定  10-11
    1.3 本课题的内容和意义  11-12
  第二章 材料和方法  12-17
    2.1 实验材料  12-14
      2.1.1 菌种  12
      2.1.2 试剂  12
      2.1.3 药材  12-13
      2.1.4 纸片  13
      2.1.5 实验仪器  13
      2.1.6 培养基  13-14
    2.2 实验方法  14-17
      2.2.1 中药的乙醇粗提物提取方法  14
      2.2.2 麦氏浊度标准管(0.5 号)的制作  14-15
      2.2.3 菌液的准备  15
      2.2.4 药液的准备  15
      2.2.5 含药纸片的制备  15
      2.2.6 菌的涂布和贴纸片  15
      2.2.7 培养时间和温度  15-16
      2.2.8 抑菌圈的测量  16-17
  第三章 结果和讨论  17-30
    3.1 纸片法测定抗白念珠菌活性方法的建立  17-26
      3.1.1 平板培养基表面涂菌方式的确定  17-20
      3.1.2 培养时间的确定  20-22
      3.1.3 琼脂含量对酮康唑抑菌圈的影响  22-23
      3.1.4 美兰含量对抑菌圈的影响  23-24
      3.1.5 干法和湿法对酮康唑抑菌效果的影响  24-25
      3.1.6 薄纸片和厚纸片的区别  25-26
    3.2 27 种中药乙醇提取物抑菌实验  26
    3.3 29 种植物油提取物抑菌实验  26-27
    3.4 讨论  27-30
第二部分 酿酒酵母利用非发酵碳源相关基因缺失突变的筛选  30-48
  第四章 文献综述  30-37
    4.1 酿酒酵母简介  30-33
    4.2 酿酒酵母碳源利用与调节  33-35
    4.3 本课题研究内容与意义  35-37
  第五章 材料和方法  37-42
    5.1 实验材料  37-39
      5.1.1 酿酒酵母缺失文库  37
      5.1.2 试剂  37
      5.1.3 培养基  37-38
      5.1.4 实验仪器  38-39
    5.2 实验方法  39-42
      5.2.1 酿酒酵母缺失文库的影印与培养  39
      5.2.2 梯度连续稀释实验  39-40
      5.2.3 网络共享资源  40-42
  第六章 结果和讨论  42-48
    6.1 酿酒酵母缺失文库在YPE 培养基上初筛  42-44
    6.2 对YPE 初筛到的菌株进一步验证  44-45
    6.3 酿酒酵母缺失文库在YPG 培养基上初筛  45-46
    6.4 对YPG 初筛到的菌株进一步验证  46
    6.5 汇总YPE 和YPG 的结果  46
    6.6 讨论  46-48
参考文献  48-53
发表论文和参加科研情况说明  53-54
致谢  54-55
附录：在YPE 和YPG 平板中生长缺陷菌株的缺失基因表  55-63

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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