学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示
牛γ干扰素基因克隆和表达及多克隆抗体制备
作 者: 胡洋
导 师: 李广兴
学 校: 东北农业大学
专 业: 基础兽医学
关键词: BoIFN-γ 基因克隆 表达 重组蛋白 多克隆抗体
分类号: S852.5
类 型: 硕士论文
年 份: 2008年
下 载: 87次
引 用: 1次
阅 读: 论文下载
内容摘要
牛γ干扰素具有较强的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用,作为生物药剂和疫苗佐剂具有广阔的应用前景。本试验成功地克隆、表达和纯化了BoIFN-γ,并制备了兔抗BoIFN-γ的多克隆抗血清,为BoIFN-γ生物学特性及其应用研究奠定了基础。本研究采用刀豆蛋白A刺激牛脾脏淋巴细胞总RNA,设计合成特异引物,采用反转录聚合酶链式反应(Reverse Transcriptase-PCR,RT-PCR)技术扩增和克隆BoIFN-γ基因,与pMD18-T载体连接后进行酶切、PCR以及序列测定和分析。结果表明,所克隆的BoIFN-γ基因全长498bp,编码166个氨基酸,与GenBank发布的羊、猪、人、鼠和鸡的IFN-γ核苷酸序列进行比较,其同源率分别为81.3%、74.9%、73.6%、53.7%和50.7%。与GenBank上发布的其它BoIFN-γ基因核苷酸序列进行比较,其同源率为100%。将BoIFN-γ基因亚克隆到表达载体pET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET-BoIFN-γ并转化大肠杆菌BL21,于37℃经0.5mmol/L IPTG诱导表达6h,SDS-PAGE和Western blot分析表明BoIFN-γ基因在大肠杆菌中获得了高水平表达,表达的融合蛋白以分子量约为25ku,且表达产物占菌体总蛋白的35%。利用镍离子亲和树脂进行纯化得到纯化的目的蛋白浓度为1.6mg/ml,将纯化蛋白免疫新西兰白兔,制备了BoIFN-γ多克隆抗血清,经琼脂扩散实验和Western blot鉴定证明所得到的多克隆抗血清与表达的融合蛋白具有良好的免疫反应性。
|
全文目录
中文摘要 8-9 英文摘要 9-10 1 引言 10-22 1.1 IFN 研究概况 10-15 1.1.1 IFN 来源 10-11 1.1.2 IFN 分类及基因结构 11-12 1.1.3 IFN 主要生物学功能 12 1.1.4 IFN 诱生 12 1.1.5 IFN 作用特点 12-13 1.1.6 IFN 抗病毒机理 13 1.1.7 IFN 基因工程研究 13-15 1.2 IFN-γ研究概况 15-20 1.2.1 IFN-γ诱生 15-16 1.2.2 IFN-γ结构 16 1.2.3 IFN-γ受体和作用机制 16-18 1.2.4 IFN-γ生物学活性 18-19 1.2.5 IFN-γ应用 19-20 1.2.6 存在的问题和展望 20 1.3 研究目的和意义 20-22 2 材料与方法 22-28 2.1 实验材料 22-23 2.1.1 实验动物 22 2.1.2 菌株和载体 22 2.1.3 工具酶和试剂 22 2.1.4 引物 22 2.1.5 主要仪器 22-23 2.2 实验方法 23-28 2.2.1 BoIFN-γ基因的克隆与序列分析 23-25 2.2.2 BoIFN-γ基因表达载体的构建 25-26 2.2.3 BoIFN-γ基因的表达及蛋白纯化 26-27 2.2.4 融合蛋白的免疫原性研究 27-28 3 结果 28-36 3.1 BoIFN-γ基因的克隆与序列分析 28-32 3.1.1 细胞培养及总RNA 的提取 28 3.1.2 RT-PCR 28-29 3.1.3 重组质粒的鉴定 29-30 3.1.4 BoIFN-γ 核苷酸序列的测定结果与分析 30-32 3.2 BoIFN-γ 基因表达载体的构建 32-33 3.3 BoIFN-γ 基因的表达和蛋白纯化 33-35 3.4 融合蛋白的免疫原性研究 35-36 4 讨论 36-39 5 结论 39-40 致谢 40-41 参考文献 41-48 攻读硕士学位期间发表的学术论文 48
|
相似论文
- 多转录因子组合调控研究,Q78
- 高校艺术教学建筑设计研究,TU244.3
- 时间表达式识别与归一化研究,TP391.1
- 拟南芥胱硫醚-γ-合成酶(D-AtCGS)基因在大肠杆菌中的表达及抗血清制备,Q943.2
- 红肉脐橙和‘国庆四号’温州蜜柑中CHS和CHI基因的克隆与表达及其对类黄酮积累的调控机制,S666.4
- 拟南芥热激因子HSFA1d响应甲醛胁迫的作用研究,Q945.78
- hBMP4和hBMP7在中国仓鼠卵巢细胞中的表达研究,Q78
- 南极冰藻GPx、GST和SAHH基因的克隆、定量分析及原核表达载体的构建,Q943.2
- 草鱼呼肠孤病毒vp5、vp7基因cDNA的克隆、表达及VP5、VP7蛋白亚细胞定位研究,S941.41
- 草鱼呼肠孤病毒vp6和ns38基因的克隆、表达及VP6和NS38免疫原性研究,S941.41
- Pin1在骨肉瘤细胞中的表达及对细胞周期的影响,R738.1
- BMP通路关键因子在人类牙胚组织中的表达检测,R78
- 《庄子》修辞策略探析,B223.5
- Gsα的过表达和缺失对果蝇大脑发育的影响,Q75
- 基于RNA测序技术的马氏珠母贝珍珠囊转录组及数字基因表达谱分析,Q786
- 磷酸化介导的UGT1A3代谢活性差异的初步研究,R346
- 军曹鱼生长激素基因(GH)的克隆和表达,Q786
- 企鹅珍珠贝Cd-MT酶联免疫检测方法的建立及试剂盒的初步研制,X835
- 稳定表达人有机阴离子转运多肽OATP1B1野生型及其突变体的HEK-293细胞系的构建,R96
- 论语文教师教学表达力,G633.3
- 条纹斑竹鲨和鲫鱼BAFF基因的克隆和性质分析,S917.4
中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学(兽医学) > 兽医基础科学 > 血清学
© 2012 www.xueweilunwen.com
|