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血竭血清指纹图谱的研究

作　者: 周晔
导　师: 金描真
学　校: 广东药学院
专　业: 药剂学
关键词: 血竭高效液相色谱法沉淀蛋白指纹图谱相似度分析
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

血竭(Sanguis Draconis)为棕榈科植物麒麟竭(Deamonorops draco BL)及同属他种植物和龙舌兰科植物剑叶龙血树(Dracaena Cochinchinensis (Lour.)S.C.Chen)及同属植物的果实或含树脂木材的乙醇提取物,植物来源分属4科5属的20余种植物,作为传统中药使用已有1500多年的历史。至1971年开发成功了国产血竭,为传统中药血竭的国产化奠定了基础。国产血竭与进口血竭化学成分不同,但都具有活血化瘀、消肿止痛、收敛止血的功效,尤其是近年来采用国产血竭治疗心脑血管疾病,有较好的疗效。本论文以国产血竭及进口血竭为研究对象,通过对指纹图谱及血清指纹图谱的研究,确定其在体外和体内化学成分上的相关性,并与药理学结果相关联,初步形成中药指纹图谱、中药血清指纹图谱及药理作用三位一体的统一,为确定一个或若干有效成分作为原药材及制剂质量控制的目标成分,克服在指纹图谱质量控制上药理作用和化学成分的相关性尚存的不足,为建立起一套完整的对中药质量全面综合的评估系统提供依据。全文由以下三部分组成:(一)绪论概述血竭的生药学、化学成分、药理作用、含量测定方法以及中药指纹图谱、中药血清指纹图谱的研究现状。(二)血竭指纹图谱的建立中药色谱指纹图谱在控制某些峰已知对应物质(即指标成分)的同时,还可通过对整个峰群的掌握,以全面控制所含物质群。使用岛津高效液相色谱仪、Diamonsil C18色谱柱及Easyguard C18保护柱,以乙腈:1%冰醋酸=38:62为流动相,280nm为检测波长,流速1.2ml/min,记录各血竭供试品溶液的HPLC图谱,运用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》软件进行相似度分析:国产血竭供试品指纹图谱相似度结果在0.797-0.976之间,与进口血竭(印度尼西亚产)有显著差异,相似度结果仅为0.268。(三)含药血清制备方法的研究血清中含有的成分才是中药的体内直接作用物质,为去除血清中固有成分及内源性杂质,高度富集入血成分,实验通过在空白血中加入广西“芒果牌”血竭,将其HPLC图谱中特征峰较为明显的5个成分的峰面积作为检测指标(其中2个为龙血素A和龙血素B),以原溶液为对照计算加样后的提取百分率,确定制备含药血清的最佳途径,结果显示先通过乙腈沉淀血浆蛋白,再使用与血样同等量的乙酸乙酯提取三次,可使血竭中5个特征性成分的提取率达到80%以上。(四)血清指纹图谱的建立在上述研究得到的实验条件基础上,测定各血竭供试品的血清HPLC图谱,原药材中11个共有峰(除印尼血竭不含9号峰——龙血素B,其血清中亦无)中有5个均在血清中有不同程度的表达,相对保留时间吻合,生成国产血竭血清对照指纹图谱后与各血清指纹图谱匹配色谱峰进行相似度分析,“芒果牌”、“版纳牌”、“柬龙牌”血竭的相似度值较为接近,分别为0.825、0.845、0.932,“龙王牌”和进口血竭(印度尼西亚产)分别为0.625、0.605,后两种血竭与对照指纹图谱差异较大。综合血清指纹图谱及药理学研究结果,进口血竭与国产血竭血清中5个共有成分可能为产生药效的物质基础,尤其可以确定龙血素A的存在与药理作用正向相关。

全文目录

摘要  6-8
Abstract  8-11
前言  11-14
第一部分绪论  14-25
  1.1 血竭概况  14-18
    1.1.1 生药学研究  14-15
    1.1.2 化学成分研究  15-17
    1.1.3 药理研究  17-18
    1.1.4 含量测定方法研究  18
  1.2 中药指纹图谱研究现状  18-19
  1.3 中药血清指纹图谱研究现状  19-20
  1.4 本论文研究的目的和意义  20-21
  参考文献  21-25
第二部分血竭指纹图谱的建立  25-38
  2.1 实验仪器与材料  25-26
    2.1.1 仪器  25
    2.1.2 试剂  25
    2.1.3 药品  25-26
  2.2 实验方法  26-31
    2.2.1 溶液的配制  26
    2.2.2 色谱条件  26-28
    2.2.3 方法学考察  28-31
  2.3 实验结果  31-36
    2.3.1 供试品测定  31-33
    2.3.2 相似度分析  33-36
  2.4 结论  36-37
  参考文献  37-38
第三部分含药血清制备方法的建立  38-46
  3.1 实验仪器及材料  38-39
    3.1.1 仪器  38
    3.1.2 试剂  38
    3.1.3 药品  38-39
    3.1.4 实验动物  39
  3.2 实验方法  39-42
    3.2.1 溶液的制备  39
    3.2.2 色谱条件  39
    3.2.3 供试品溶液HPLC 图谱  39-41
    3.2.4 方法学考察  41-42
  3.3 蛋白沉淀剂的选择  42-44
  3.4 提取次数的选择  44-45
  3.5 提取溶剂的选择  45
  3.6 结论  45-46
第四部分血清指纹图谱的研究  46-58
  4.1 实验仪器及材料  46-47
    4.1.1 仪器  46
    4.1.2 材料  46
    4.1.3 药品  46
    4.1.4 实验动物  46-47
  4.2 实验方法  47-50
    4.2.1 样品的制备  47
    4.2.2 色谱条件  47
    4.2.3 方法学考察  47-50
  4.3 实验结果  50-55
    4.3.1 供试品测定  50-52
    4.3.2 相似度分析  52-55
  4.4 结论  55-58
参考文献  58-59
总结  59-60
在学期间发表论文情况  60-61
致谢  61

血竭血清指纹图谱的研究

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