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昆明山海棠有效成分提取方法优化和HPLC指纹图谱的研究

作　者: 胡建林
导　师: 刘晋祎
学　校: 第三军医大学
专　业: 卫生毒理学
关键词: 昆明山海棠 雷公藤甲素 指纹图谱
分类号: R284.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


实验目的:昆明山海棠[Tripterygium Hypoglaucum (Levl.) Hutch,THH]为卫矛科雷公藤属植物,是一种民间传统中药,具有消炎、解毒、祛风湿等作用。临床用于类风湿性关节炎、慢性肾炎和各种皮肤病。昆明山海棠具有良好的药理作用,国内外学者对其生药学、化学成分、药理作用、临床应用等方面进行了较多的研究和报道。该中药片剂收载于2005年版《中华人民共和国药典》。昆明山海棠制剂虽然应用多年,但总体说仍然缺少有效质量控制手段;加之产地的不同,其有效成分含量差异较大,为了进一步研究并完善其质量控制技术方法,本文以昆明山海棠中有效成分雷公藤甲素为指标,对昆明山海棠药材有效成分的提取方法和含量测定进行了研究,并对11个不同产地昆明山海棠药材中雷公藤甲素含量进行了分析,同时对不同产地昆明山海棠高效液相指纹图谱进行了分析。内容及方法:1.应用RP-HPLC法,建立了雷公藤甲素标准品的测定方法;2.以热提取法为基础,以雷公藤甲素为标准,采用单因素试验和正交试验对昆明山海棠中的主要有效成分提取方法进行了优化;3.应用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定了不同产地昆明山海棠中雷公藤甲素的含量;4.分析了不同产地的昆明山海棠药材高效液相指纹图谱,利用中药指纹图谱相似度评价系统软件分析了昆明山海棠特征指纹图谱及不同产地昆明山海棠的差异。实验结果:1.建立了昆明山海棠中有效成分雷公藤甲素的测定方法,并以雷公藤甲素为标志,对THH的提取方法进行了优化,通过单因素实验和正交试验,确定其最佳提取条件为:乙酸乙酯作为提取溶剂,热提取时间5h,温度75℃,固液比为1:10。2.对云南不同产地的11个昆明山海棠药材样品中的雷公藤甲素的含量进行了测定,结果表明不同产地THH根部雷公藤甲素的含量差异较大,玉溪元江县和昆明禄劝县产THH根部雷公藤甲素的含量较高,而昆明寻甸县、曲靖马龙县产THH根部雷公藤甲素含量较低,相差达4倍左右。这说明测定THH中有效成分作为其药材质量的标志具有重要意义,也为制订科学的昆明山海棠制剂质量控制标准提供了数据。3.建立了昆明山海棠药材高效液相指纹图谱方法:甲醇为提取溶剂,回流提取,过滤后直接进样;采用甲醇-乙腈-水梯度洗脱;检测波长210nm。通过对方法学稳定性、重复性和精确度分析,均表明相关条件适宜于昆明山海棠药材高效液相指纹图谱的分析。4.初步建立了11个不同产地昆明山海棠药材指纹图谱,发现有10个峰是共有的,确定为共有特征峰;10个共有特征峰峰面积总和大于90%,可以作为THH药材鉴定的标志峰。通过对指纹图谱中峰的位置、保留时间、峰面积、整体图貌等特征对谱图进行分析,发现9个产地的昆明山海棠药材相似度达到0.9以上,但大理漾濞、大理宾川产的昆明山海棠药材相似度仅为0.651、0.527,存在着较大差异;此外,不同产地各成分含量差异较大,提示其药效、毒性等方面可能存在较大差异。相关指纹图谱的研究数据,为THH药材鉴定、药效的评估等质量控制提供了数据。结论:1.建立了的雷公藤甲素RP-HPLC检测方法,总体操作简便、准确,灵敏度高,重复性好,可用于昆明山海棠片中雷公藤甲素的含量测定。2.优化了THH有效成分提取实验方法,以雷公藤甲素为标准,其最佳提取条件为:乙酸乙酯作为提取溶剂,热提取时间5h,温度75℃,固液比为1:10。3.测定了不同产地THH根部雷公藤甲素的含量,不同产地有一定的差异。玉溪元江县和昆明禄劝县产THH根部雷公藤甲素的含量较高,而昆明寻甸县、曲靖马龙县产THH根部雷公藤甲素含量较低。4.建立了11个不同产地昆明山海棠药材指纹图谱,其中9个产地的昆明山海棠药材相似度均达到0.9以上;但不同产地各组分含量差异较大。相关指纹图谱的研究数据,为THH药材鉴定、药效的评估等质量控制提供了数据。

全文目录


英文缩写一览表  4-5
英文摘要  5-6
中文摘要  6-8
前言  8-10
第一部分 昆明山海棠中有效成分提取方法的优化  10-21
  材料与方法  10-11
  实验结果  11-19
  讨论  19-21
第二部分 不同产地THH 中雷公藤甲素的测定以及高效液相指纹图谱的分析  21-33
  材料与方法  21-23
  实验结果  23-31
  讨论  31-33
全文结论  33-34
致谢  34-35
参考文献  35-37
文献综述 中药质量评价新方法-中药指纹图谱  37-53
  参考文献  50-53
研究生期间发表的论文  53

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