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枸橼酸杆菌对β-内酰胺类抗生素的耐药性及耐药基因研究

作　者: 陈大斌
导　师: 周岐新；凌保东；雷军
学　校: 重庆医科大学
专　业: 药理学
关键词: 枸橼酸杆菌 β-内酰胺酶耐药性基因定点突变
分类号: R450
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

目的了解川东北地区临床分离枸橼酸杆菌的耐药情况,为临床合理用药提供参考依据。筛选产ESBLs菌株并进行基因分型,了解其分子流行病学特征;进一步研究CTX-M型超广谱β-内酰胺酶的分子结构特征。方法1.用琼脂二倍稀释法检测β-内酰胺类药物对24株枸橼酸杆菌临床分离株的MIC,纸片法筛选产ESBLs菌株;提取β-内酰胺酶进行酶活性测定。2.设计针对最常见的三种类型超广谱β-内酰胺酶blaTEM、blaSHV和blaCTX-M基因的三对引物,对筛选出的12株产超广谱β-内酰胺酶菌株进行耐药基因的PCR扩增检测。3.采用重叠延伸PCR定点诱变技术,对CTX-M型超广谱β-内酰胺酶Ser240(丝氨酸)AGC进行定点突变,分析突变前后酶活性的变化。结果1.15种抗菌药物的MIC检测结果发现,24株枸橼酸杆菌对AMP、CEF两种抗菌药物的耐药率最高(100%),对其他药物的耐药率由高到低依次是FAM、CFP、CFZ、PIP、CTX、FEP、SAM、CAZ、CAZ/SB、CRO、TZP、FD(87.5%—4.17%),对IMI完全敏感。24株耐药菌中筛选到产ESBLs菌株12株。2.PCR扩增检测发现:8株耐药菌株为产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶菌株;3株耐药菌为产TEM型超广谱β-内酰胺酶菌株;2株耐药菌为产SHV型超广谱β-内酰胺酶菌株。1株菌株同时产生TEM和CTX-M两种酶。余12株菌株未检测出上述三种酶。3.对CTX-M酶Ser240进行了定点突变,观察到当Ser240突变为Gly240后,CTX-M酶的活性完全丧失。结论1.亚胺培南是治疗本地区产ESBLs枸橼酸杆菌所致感染有效的药物。2.本地区产ESBLs枸橼酸杆菌中CTX-M族酶检出率最高,其次是TEM族酶,检出率最低的是SHV族酶。3.Ser240对于维持CTX-M酶的活性非常重要。

全文目录

符号说明  6-8
中文摘要  8-10
英文摘要  10-13
前言  13-14
第一部分枸橼酸杆菌临床分离株的耐药性及表型鉴定  14-22
  1. 实验材料  14-15
  2. 实验方法  15-18
  3. 实验结果  18-21
  讨论  21-22
第二部分产超广谱β-内酰胺酶枸橼酸杆菌的基因检测  22-29
  1. 实验材料  22-23
  2. 实验方法  23-25
  3. 实验结果  25-28
  讨论  28-29
第三部分 CTX-M 型超广谱β-内酰胺酶基因定点突变对酶活性的影响  29-34
  1. 实验材料  29
  2. 实验方法  29-31
  3. 实验结果  31-32
  讨论  32-34
全文总结  34-35
参考文献  35-38
文献综述：柠檬酸杆菌属的耐药机制研究进展  38-43
致谢  43-44
攻读硕士期间发表的论文  44

枸橼酸杆菌对β-内酰胺类抗生素的耐药性及耐药基因研究

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