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侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤双向凝胶电泳蛋白质图谱的建立及其差异分析

作　者: 陈委
导　师: 刘志雄
学　校: 中南大学
专　业: 外科学
关键词: 垂体腺瘤侵袭性差异蛋白质组学 2-D电泳质谱癌基因DJ-1蛋白热休克蛋白27 蛋白免疫印迹技术
分类号: R736.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

目的:利用蛋白质组学方法,首次建立可信的人类侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤组织的双向凝胶电泳蛋白质图谱,研究其表达差异,为识别、鉴定与垂体腺瘤侵袭性相关的蛋白奠定基础。材料与方法:收集中南大学湘雅医院神经外科垂体腺瘤标本20例,等待病理切片结果筛选其侵袭性,其中侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤各10例。提纯垂体腺瘤总蛋白质后进行用固相pH梯度(IPG)双向凝胶电泳(2-DE)分离总蛋白,凝胶经考马斯亮蓝染色后,应用ImageMaster 2D图象分析软件进行分析比较、识别其表达差异的蛋白质,利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对差异表达的蛋白质点进行质谱分析,得到相应的肽质指纹图谱(PMF),搜索数据库鉴定差异蛋白质。结果:①首次建立了可信的人类侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤的双向凝胶电泳蛋白质图谱。随机挑选的侵袭性与配对非侵袭性垂体腺瘤组织各3块凝胶的平均蛋白质点数分别为1080±24、1035±28,平均匹配点数为909±45、828±56,平均匹配百分率达84.3%、79.5%;同一组织不同胶间蛋白质点在等电聚焦(IEF)方向的偏差是(1.563±0.259)mm,在十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)方向上的偏差为(1.088±0.206)mm;②比较分析人类侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤凝的双向凝胶电泳蛋白质图谱,两者间平均匹配点数为899±58,匹配百分率达83.3%,随机对30个差异蛋白质点进行了肽质指纹图分析,鉴定出一些与细胞生长增殖、代谢、细胞周期调控、信号转导等有关的蛋白质。结论:本研究首次建立了可信的人侵袭性垂体腺瘤的双向凝胶电泳蛋白质图谱,识别鉴定了癌基因DJ-1蛋白、热休克蛋白27等一些可能与垂体腺瘤侵袭性相关的蛋白质。目的:本课题二旨在研究垂体腺瘤中癌基因DJ-1蛋白(DJ-1)、热休克蛋白27(HSP27)表达是否与其侵袭性有关,研究与肿瘤关联较密切的DJ-1、HSP27的表达水平作为判断垂体腺瘤侵袭性和预后指标的可能性。材料与方法:选取经手术切除且病理诊断为垂体腺瘤、具有完整内分泌资料的患者20例,根据Hardy-Wilson及Knosp分级、分期标准,结合磁共振图像及病理活检判断其肿瘤侵袭性,应用蛋白免疫印迹技术(Western Blot)分别检测每例肿瘤中DJ-1、HSP27的表达水平,分析DJ-1、HSP27与肿瘤侵袭性之间的关系。对结果应用SPSS 13.0 forWindows软件包进行统计分析。结果:①:10例侵袭性垂体腺瘤中DJ-1、HSP27蛋白表达的强阳性率分别为70%(7/10)、80%(8/10),10例非侵袭性垂体腺瘤中DJ-1、HSP27蛋白表达的强阳性率分别为10%(1/10)、10%(1/10),侵袭性垂体腺瘤明显高于非侵袭性垂体腺瘤(P＜0.05)。②DJ-1、HSP27的表达水平与垂体腺瘤侵袭性之间存在显著的正相关关系。结论:癌基因DJ-1或HSP27在侵袭性垂体腺瘤表达强阳性率明显高于非侵袭性垂体腺瘤(分别为70%/10%、80%/10%,P＜0.05)。癌基因DJ-1、HSP27的蛋白异常表达在垂体腺瘤形成和发展中发挥着较重要的作用,提示DJ-1、HSP27蛋白的表达强弱与垂体腺瘤侵袭程度相关,其表达水平有可能作为判断垂体腺瘤侵袭性预后与治疗的指标之一。

全文目录

中文摘要一  4-5
中文摘要二  5-6
英文摘要1  6-8
英文摘要2  8-11
常用英文缩写词表  11-12
前言  12-14
第一章侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤二维电泳和质谱分析  14-40
  引言  14
  材料和方法  14-24
  结果  24-27
  讨论  27-32
  小结  32-33
  附图  33-40
第二章 DJ-1、HSP27在侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤中的表达差异  40-48
  前言  40
  材料与方法  40-42
  结果  42-44
  讨论  44-46
  小结  46-47
  附图  47-48
参考文献  48-54
综述  54-69
致谢  69-70
攻读学位期间主要的研究成果目录  70

侵袭性与非侵袭性垂体腺瘤双向凝胶电泳蛋白质图谱的建立及其差异分析

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