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siHybrids技术沉默铜绿假单胞菌外排泵mexB基因体外效应研究
作 者: 毛艳
导 师: 宋建新
学 校: 华中科技大学
专 业: 内科学
关键词: siHybrids技术 RNAi 铜绿假单胞菌 外排泵 real-timePCR MIC
分类号: R378
类 型: 硕士论文
年 份: 2010年
下 载: 35次
引 用: 0次
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内容摘要
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目的:研究siHybrids技术对铜绿假单胞菌PAO1外排泵mexB基因体外沉默效应。方法:1.针对铜绿假单胞菌野生株PAO1外排泵mexB基因设计并合成3条特异性siHybrids分子和一条阴性对照siHybrids分子。2.在分子浓度为50nM下,分别以合成设计的siHybrids分子干扰铜绿假单胞菌PAO1,并设实验组为铜绿假单胞菌PAO1空白对照组,阴性对照组scambl(esc)-001,干预组siHybrids(si)-001,siHybrids(si)-002及siHybrids(si)-003。3.分别在干预12小时后及24小时后采用实时荧光定量PCR检测各实验组中外排泵靶基因mexB[1]基因mRNA表达水平。4.进一步采用Mueller-Hinton倍比稀释法检测50nM浓度的siHybrids分子对铜绿假单胞菌PAO1与氯霉素(CP),红霉素(EM),左氧氟沙星(L-OFLX)干预作用前后的MIC(最小抑菌浓度).结果:1.不同siHybrids分子干预PAO1 12小时后,mexB基因mRNA的表达量无明显差异性。2.干预24小时后,mexB基因mRNA的表达量干预组(si-001,si-002,si-003)比空白对照组,阴性对照组(sc-001)有明显下降。3.对比干预12小时,24小时后mexB基因mRNA表达量,可以发现空白对照组,阴性对照组(sc-001)mRNA的表达量成上升趋势,而干预组(si-001,si-002,si-003)mexB基因mRNA表达量均呈下降趋势。4.siHybrids分子在干预24小时前后氯霉素(CP),红霉素(EM),左氧氟沙星(L-OFLX)的MIC无明显差异性结论:在mRNA的表达水平上, siHybrids分子能体外干预铜绿假单胞菌PAO1 mexB基因mRNA的表达,此种沉默作用呈现时间依赖性,且在24小时能有效地发挥干预作用。
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全文目录
一、中文摘要 5-7
二、英文摘要 7-9
三、论文正文 9-33
前言 9-10
材料与方法 10-23
实验结果 23-27
讨论 27-31
参考文献 31-33
四、综述 33-52
五、致谢 52
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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学） > 病原细菌
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